摘要 |
Un método para determinar la cantidad de proteína AKT, el nivel de activación de la proteína AKT o ambos en una muestra celular o tisular, comprendiendo el método las etapas de: (a) teñir inmunohistoquímicamente la proteína AKT en una pluralidad de sedimentos celulares de control usando un anticuerpo marcado de forma detectable dirigido contra AKT, donde la cantidad de proteína AKT, el nivel de activación de la proteína AKT o ambos en la pluralidad de sedimentos celulares de control se conoce independientemente, y donde la expresión, el nivel de activación o tanto la expresión como el nivel de activación de AKT en cada uno de la pluralidad de sedimentos celulares de control no son iguales; (b) determinar una densidad óptica promedio de proteína AKT teñida por píxel de área celular para cada uno de la pluralidad de sedimentos celulares de control teñidos en (a); (c) generar una curva de calibración que relacione la cantidad conocida de proteína AKT, el nivel de activación de la proteína AKT o ambos con dicha densidad óptica promedio de proteína AKT teñida por píxel de área celular determinada en (b) para cada uno de la pluralidad de sedimentos celulares de control; (d) teñir inmunohistoquímicamente la proteína AKT de dicha célula o tejido usando dicho anticuerpo marcado de forma detectable dirigido contra la proteína AKT; (e) determinar una densidad óptica promedio de proteína AKT teñida por píxel de área celular en dicha muestra celular o tisular; (f) determinar la cantidad de proteína AKT, el nivel de activación de la proteína AKT o ambos en dicha muestra celular o tisular comparando la densidad óptica promedio de la proteína AKT teñida por píxel de área celular determinada en la etapa (e) en dicha muestra biológica con la curva de calibración generada en la etapa (c), donde la cantidad de proteína AKT, el nivel de activación de la proteína AKT o ambos se deriva de la curva de calibración.
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