| 摘要 |
1. Способ получения рекомбинантных белков, модифицированных присоединением альбумина человека из культуральной жидкости дрожжей, включающий культивирование штаммов дрожжей в питательной среде, обеспечивающей рост клеток и синтез целевых белков, удаление клеток, концентрирование среды, осаждение целевого белка и его очистку с использованием гель-фильтрации и аффинной хроматографии, отличающийся тем, что культивируют штаммы дрожжей Pichia pastoris, которые являются продуцентами гибридных белков (альбумин-интерлейкин-2 человека и альбумин-альфа 16-интерферон человека), культивирование проводят в модифицированной среде, стадию индукции синтеза целевого белка проводят при 20-25°С, очистку проводят осаждением целевого белка при 75% насыщения сульфата аммония или 25% полиэтиленгликолем 3350, гель-фильтрацией на сорбенте типа Сефакрил HR 200 или BioRad P-300 и аффинной хроматографией на Cibacron F3GA. ! 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что гель-фильтрацию на сорбенте типа Сефакрил HR 200 или BioRad P-300 проводят с использованием в качестве уравновешивающего и элюирующего раствора 20 мМ натрий-ацетатного буфер, рН 5,5. ! 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что аффинную хроматографию на Cibacron F3GA проводят с использованием в качестве уравновешивающего раствора 20 мМ натрий-ацетатного буфер, рН 5,5, при этом отмывку осуществляют последовательным использованием уравновешивающего буферного раствора и уравновешивающего буферного раствора, содержащего 0,5 М хлористого натрия, а элюцию целевого белка проводят градиентом концентрации тиоцианата калия 0,5-1,0 М в 20 мМ натрий-ацетатном буфере, рН 5,5 или 50 мМ трис-HCl, рН 7,5-8,5. |
