一种角质酶的分离纯化方法

摘要

一种角质酶的分离纯化方法，属于生物制品分离纯化技术领域。本发明采用嗜热子囊菌Thermobifida fusca为出发菌株，经液体深层发酵制备的角质酶，在经过硫酸铵沉淀、疏水色谱之后，得到了电泳纯的角质酶溶液，可用于后续的蛋白质测序和性质研究。本发明方法步骤简单，酶纯度高，是一种简便有效的酶分离纯化方法。

主权项

1.一种角质酶的分离纯化方法，其特征是工艺步骤为：(1)硫酸铵沉淀将嗜热子囊菌Thermobifida fusca发酵液离心去除菌体后，上清液中加入硫酸铵粉末，达到60％-80％硫酸铵浓度，缓慢搅拌使之完全溶解，并于4℃静置4-24h，将静置后的混合液12000rpm冷冻离心15-30min，收集蛋白沉淀，将沉淀复溶于适量pH7.5的Tris-HCl缓冲液中，并加入硫酸铵粉末达20％的硫酸铵浓度，制成上样液；(2)疏水色谱采用Phenyl HP疏水柱，以含有20％硫酸铵的pH7.5的Tris-HCl缓冲液平衡过夜，将1个柱体积的上样液以0.5-1mL/min的速度加入疏水色谱中，用pH7.5的Tris-HCl缓冲液以同样的速度洗脱至280nm紫外吸收峰为0；然后以1个柱体积的去离子水洗脱，收集活性峰，即为所制备的电泳纯角质酶溶液。