一种嗜热耐高温葡聚糖磷酸化酶及其制备方法与应用

摘要

一种嗜热耐高温的葡聚糖磷酸化酶及其制备方法与应用，属于生物工程技术领域。该酶的最适酶活温度为75℃，具有较为宽的酶适应温度，在70℃以上具有很高的酶活；该酶的最适酶活pH为6.0。该酶具有独特的底物特异性，其降解方向和合成方向所需的最小糖链长度分别为三糖和二糖，均比普通的葡聚糖磷酸化酶少一个糖基以上。该酶的制备方法，包括质粒、菌株与培养基的选择，PCR扩增及重组质粒的构建，基因的诱导表达与蛋白质的纯化。该酶具有极高的热稳定性，可用于医药、食品、生物工程领域1－磷酸葡萄糖及寡糖的制备。

主权项

1、一种葡聚糖磷酸化酶，其特征在于，具有DNA序列如下：atgcggaaac acttaaaagg taaagctcat aagaaattac acatgataat cagtatcact 60gcggagttag gaattgactt tggtgagaac tttgcaggtg gtttaggcgt tctcgaagga 120gataagtttt atgcctcagc aagattagga attgattaca ctgtctttac attattttat 180agaaaaggat atactggaaa tgaggagaaa cagaaagaat tgcttaaaaa tcttgttaaa 240gaatgggaga ctgaaataga acttaaaaag ggtaaaataa agatcgaata cttaacgtat 300aaacttaata ctgcaaaagc tatatttatt aacattttat caccagattg ggctaaaaga 360cttaacgaga aactttacat tgagaattct gaagaagata gattttacaa atatttagtc 420cttgctaaag caactgagaa atacattagt gagaagatag gttgggataa gataaaatat 480gttgacttgc aagaagccta tccgtctttc ttaccattat taaaatattt tcctagatac 540agaataataa tacacacacc agcaccgtgg ggtcatccca catttcctgc aagatatttc 600aaagaagaat ttggctttga atttcccttt gatccagttg ttatgactga aataggatta 660tcttcagccg tgcaaggaat agtagtctca aaaaagatgc ttcatcacgt aagcaaaaca 720tttccacatc atatgcataa aataaaggct ataacgaatg ctgttgaaat acccagatgg 780agacatccat tattaaataa cgtcaaagat cttgatgatt ttatcaagaa gaaaaaagaa 840gtgaaaaaag agagtttaaa gaaactagga aaggagagtg ataaacccac aataggctgg 900gtaaggagaa taactcaata taaaagacca gaattcatat taagattaat tgacgaatta 960agggatgatg tcgtttttat aattggtgga aaggctcatc catatgagta ttatggtgta 1020gaattagaga aaaagtttaa ggaatatgct caaaaaagaa ataatgtaat ttacgttcag 1080ggggtggata tacagcaaat gaaattagca atatggtcta gtgacatatg gacctttaca 1140ccttattctg gatgggaggc tagtggaaca agttttatga aggctggagt gaatggagtt 1200ccttctgtag catcaagaga cggtgccgta ccagagatta ttaaggatgg atataatggt 1260tggctttatg gagaagatag atacgagctt ctaccagtag acacatatga tagggaatat 1320gaggaattcg caagaaaggt gaaggaggct ttaaacaagt attatgaagt tggctataat 1380gcttatcata ctttttccga tttttgttct atggatagac ttatgaaaga atacgcttta 1440taa 1443。