摘要 |
Procedimiento para la producción y purificación de somatostatina en células de Escherichia coli a partir de la expresión en las mismas del gen codificante clonado en el vector pGRV1. Mediante técnicas básicas de ingeniería genética se ha clonado el extremo N-terminal de la beta-galactosidasa de Kluyveromyces lactis en el plásmido comercial pET17xb, generando dos sitios de restricción únicos susceptibles de ser utilizados para la clonación de secuencias codificantes de péptidos, dando lugar al plásmido pGRV1. La secuencia codificante de la hormona somatostatina se ha obtenido mediante una amplificación en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando oligonucleótidos solapantes, clonando posteriormente el gen en el plásmido pGRV1, para dar lugar al plásmido pSOMA. La cepa de Escherichia coli BL21 (DE3) se transformó con el plásmido pSOMA dando lugar a la cepa CECT5840. Utilizando equipos de fermentación convencional se han obtenido cantidades suficientes de proteína de fusión, que tras su digestión con bromuro de cianógeno se han purificado cromatográficamente. El péptido obtenido muestra propiedades cromatográficas coincidentes con las de un patrón comercial.
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