蚓激酶干粉的制备方法

摘要

本发明涉及一种蚓激酶干粉的制备方法，该方法包括如下步骤：将活蚯蚓用水清洗后，置于糖或氯化钠中，在室温下静置，刺激蚯蚓将其消化道内的分泌物吐尽；然后加入蚯蚓体积的1～8倍的水，进行细胞破碎，制成的匀浆经过除渣、澄清处理后，采用阴离子交换层析柱或亲和层析柱分离，收集活性峰部分的流出液，浓缩脱盐后再过滤、除菌；将得到的澄清液于-30～-40℃下冷冻；然后在真空下干燥，得到蚓激酶干粉，或是在无菌条件下将澄清液于喷雾干燥机内，经压缩空气雾化后脱水，得到蚓激酶干粉。该方法得到的蚓激酶干粉中有效组分含量高、质量易控、且易于大规模工业生产。

主权项

1、一种蚓激酶干粉的制备方法，包括如下步骤：1)蚯蚓清洗：将活蚯蚓用水清洗后，按每公斤蚯蚓加入0.1～0.3公斤糖，或0.2～0.4公斤氯化钠，在室温下搅拌均匀，静置20～40分钟，然后用30～50℃的温水将蚯蚓身上的糖或氯化钠及污物洗去；2)制浆：加入蚯蚓体积的1～8倍的水，用珠磨、胶体磨机或高压匀浆机将经步骤1)清洗过的蚯蚓进行细胞破碎，制成匀浆；3)除渣：将步骤2)得到的匀浆通过过滤或离心除去其中的粗渣；所述的过滤是采用滤网孔径为5～20mm的不锈钢过滤器过滤；4)澄清：经步骤3)除渣后的匀浆液，采用高速离心机或微孔膜过滤器处理2小时，得到澄清液；5)分离：采用DEAE-阴离子交换层析柱或DEAE Affi Gel Blue三嗪染料亲和层析柱分离步骤4)得到的蚯蚓澄清液，用0.01～0.8M的醋酸盐溶液、磷酸盐溶液及0.01～1.8M的氯化钠溶液洗脱，收集活性峰部分的层析流出液；6)浓缩脱盐：将步骤5)收集的层析液过滤以除去无机盐和小分子物质，脱去大部分水，使蛋白浓度达到20g/L，且浓缩液电导率≤0.15×103μs/cm时结束脱盐，得到除盐浓缩液；所述的过滤是采用标准截流分子量为0.5～50K的平板膜、卷式膜或中空纤维超滤装置进行的；7)澄清过滤：采用孔径为0.45～2μm的深层微孔膜或折叠式膜微孔膜过滤装置，滤除步骤6)得到的除盐浓缩液中的悬浮颗粒，得到澄清液；8)除菌：采用0.22μm的除菌滤膜过滤装置及辐照装置处理步骤7)的澄清液，除去菌体；9)干燥：在无菌条件下将步骤8)除菌后的澄清液于-30～-40℃下冷冻8～12小时；然后在0.2mmHg的真空度下，升温至25～30℃，干燥10小时；继续升温至36～38℃，真空干燥14～15小时，得到蚓激酶干粉。