滤纸片气相色谱－质谱分析检测尿有机酸/氨基酸代谢产物的方法

摘要

本发明公开了一种滤纸片气相色谱-质谱分析检测尿有机酸/氨基酸代谢产物的方法。该方法是将滤纸收集的尿液经过洗脱、肟化反应、萃取、甲基硅烷化衍生后采用气相色谱仪-质谱仪联合对尿样进行检测。本发明的方法具有如下优点：1.采用滤纸收集尿标本，适合我国人口众多、幅员辽阔、地区发展不平衡的特点，有利于进行大规模的遗传代谢缺陷病的高危筛查、研究及远程分析，符合我国国情；2.具有肟化处理程序，利于α-酮酸的检出，不致漏诊重要的支链酮酸代谢障碍；3.通过萃取，有机酸/氨基酸代谢产物回收率高，重复性好。色谱杂峰少，不至污染色谱毛细管柱和质谱离子源；4.采用气相色谱-质谱定性/定量分析条件稳定，样本色谱峰分离效果良好，样本分析时间短，适合高通量样本筛查分析。

主权项

1、滤纸片气相色谱-质谱分析检测尿有机酸/氨基酸代谢产物的方法，其特征步骤是：1)采用滤纸片收集尿标本；2)对滤纸尿标本进行洗脱处理，测定肌酐含量确定尿液浓度，得到尿液样本；3)对尿液样本完成a-酮酸的肟化反应；4)采用有机溶剂进行萃取；去除少许残余水份，加入外标饱和24烃，用纯净氮气吹干；5)对上述处理的样本进行甲基硅烷化衍生；6)采用气相色谱仪-质谱仪联合对尿样进行检测：采用无分流式进样，进样口温度设定为250℃；氦气为载气1ml/min，界面温度250℃；质谱检测采用电子离解模式总离子扫描方式EI 70eV，质荷比范围50m/z到600m/z，扫描周期0.4s；色谱柱箱程序升温从60℃开始，20℃/min升温至90℃后停留4min，然后以8℃/min升温至300℃，样本分析时间25min；计算机系统记录色谱和质谱图形，应用质谱图谱库参比鉴定和各色谱峰的丰度进行定性和定量分析。