适合于分子生物学研究的家蚕丝腺细胞分离方法

摘要

本发明公开了一种适合于分子生物学研究的家蚕丝腺细胞分离方法。是以新鲜的或冷冻的家蚕幼虫为材料，在预冷的昆虫生理盐水中解剖幼虫，获取家蚕中部和后部丝腺，并用生理盐水充分洗净后，转入预冷的乙醇或甲醇中，浸渍一定时间后，将丝腺固定，用一把镊子一边抱握丝腺表层，一边拉动，剥取丝腺细胞。将上述丝腺细胞在真空干燥器中干燥、或在自然条件下干燥后，按常规的DNA提取方法、或蛋白质提取方法，分别制备得到家蚕中部和后部丝腺细胞DNA样品、或蛋白质样品。本发明提供了一种简捷、完整的适合于分子生物学研究的家蚕丝腺细胞制备方法，为从事有关家蚕丝腺细胞基因和蛋白质方面的研究奠定基础。

主权项

1、适合于分子生物学研究的家蚕丝腺细胞分离方法，其特征在于：1)以任何家蚕品种的、新鲜的或冷冻的幼虫为材料，在0℃～50℃的(1)0.1％～5％克/毫升的NaCl组成的生理盐水、(2)0.5％～5％克/毫升的KCl组成的生理盐水、(3)0.01％～5％克/毫升的NaCl，0.01％～5％克/毫升的KCl，0～0.5％克/毫升的CaCl2，0～5％克/毫升的MgCl2，0～10％克/毫升的蔗糖组成的生理盐水、(4)在1000ml溶液中含有650～850mg CaCl2，4000～4200mg KCl，2080～2480mg MgCl2.6H2O，2580～2980mg MgSO4.7H2O，330～370mg NaHCO3，860～900mg NaH2PO4组成的生理盐水、或(5)在1000ml溶液中含有550～750mg CaCl2，4000～4300mg KCl，2000～2200mg MgCl2，2500～2900mg MgSO4.7H2O，340～360mg NaHCO3，1000～1200mg NaH2PO4.4H2O组成的生理盐水中解剖幼虫，分别获取家蚕中部和后部丝腺，用上述的生理盐水充分洗净后，转入预冷的30％-90％的乙醇或甲醇中，浸渍30秒～72小时后，将丝腺固定，用一把镊子一边抱握丝腺表层，一边拉动，剥取丝腺细胞；2)将上述丝腺细胞在真空干燥器中干燥5分～24小时、或在自然条件下干燥5分～72小时后，按常规的DNA提取方法、或蛋白质提取方法，分别制备得到家蚕中部和后部丝腺细胞DNA样品、或蛋白质样品。