一种鱼类电脉冲精子转基因方法

摘要

本发明公开了一种优化的鱼类电脉冲精子转基因方法，该方法基于电脉冲处理将使外源基因和精子外膜结合更紧密的原理，将电脉冲转基因法和精子介导转基因法相结合，对混有外源基因，并保存在保存液中的精子进行电脉冲处理，再与卵子受精，可使转基因的成功率达到19.6％～46.8％。对5月龄的草鱼尾鳍通过此法，经PCR检测得知，有35.7％的个体中含有外源基因。本方法具有简便、易行、高效、便宜和适用范围广等优点，对于卵膜不易去除，或卵很脆弱的鱼类，尤其适用。

主权项

1、一种鱼类电脉冲精子转基因方法，其特征在于，可采用贮藏精子，提前处理精子，超量使用精子，对混有外源基因的精子悬浮液进行电脉冲处理，再用处理过的精子使卵子受精，具体方法包含下列步骤：a、构建外源基因重组质粒，用脱氧核糖核酸内切酶将外源基因重组质粒线性化，溶解为浓度为1～10μg/μl的溶液；b、采用人工催青方法获得成熟的鱼类精子和卵子，将精子保存在4℃下等体积的精子保存液中备用；c、取90μl精子悬液加入电脉冲样品杯，再加入10μl外源基因溶液，吹打混匀，用电脉冲仪进行处理；d、将电脉冲处理过的精子迅速与卵子混和，进行人工干法授精、孵化。