一种家蚕微粒子病的核酸分子杂交检测方法

摘要

本发明公开了一种家蚕微粒子病的核酸分子杂交检测方法。该方法采用核酸分子杂交技术，提取家蚕微孢子虫的DNA，通过PCR，将PCR产物克隆到重组载体质粒中，用N.B.PCR产物经DIG标记制成分子探针，采用DNA Dot blot检测家蚕微粒子病病原孢子。本发明所提取的各种微孢子虫基因组质量好、含量高，所设计的引物为N.B.孢子所特有，引物与模板DNA特异性高度吻合，检测准确率＞98％，可在家蚕微粒子原孢子的早期，快速、定性、定量地进行检测，是一种方便、高效、准确的检测方法。

主权项

1、一种家蚕微粒子病的核酸分子杂交检测方法，其特征在于，该方法采用蛋白酶K苯酚氯仿抽提法提取家蚕微孢子虫的DNA，测定其特异DNA片断，合成引物，通过聚合酶联反应(Polymerase Chain reaction，简称PCR)扩增得到PCR产物，将PCR产物微孢子虫特异DNA序列克隆到带有SP6噬菌体的启动子pGEN-3Z重组载体质粒中，经过重组质粒序列分析，用家蚕微孢子虫孢子(Nosema bombycis，简称N.B.)PCR产物(217bp，即217个碱基对)经异羟基洋地黄毒苷(即地高辛，Digoxigenin，简称DIG)标记制成分子探针，采用点杂交法(DNA Dot blot)检测家蚕微粒子病病原孢子。