压电基因诊断实时定量分析方法与仪器

摘要

本发明的压电基因诊断实时定量分析方法与仪器属于基因的体外检测方法和实施该方法的仪器。旨在解决已有技术准确性差、操作繁杂等问题。本方法是采用压电基因诊断芯片和频率检测仪,利用多重PCR技术进行杂交—延伸—变性的温度循环扩增靶基因,监测并获得频率变化与靶基因浓度的的线性关系,再用外标准曲线进行定量分析。本仪器包含壳体、电源及其相联接的电路和主板模块、分析软件、样品制备模块、定位液流模块、压电基因诊断芯片检测模块。适于临床疾病诊断及分子机理的研究、监测流行病和传染病扩散、有害微生物的发生和扩散等。

主权项

1、压电基因诊断实时定量分析方法，其特征在于采用压电基因诊断芯片和频率检测仪，在压电基因诊断芯片的电极阵列上固定有至少一种疾病基因的探针，将已加入含至少一种靶基因的引物、Taq-DNA多聚酶、三磷酸脱氧核苷的基因诊断试剂的样品与压电基因诊断芯片接触，进行杂交-延伸-变性的温度循环，其杂交温度为30-70℃，延伸温度为65-80℃，变性温度为85-99℃，温度循环的起点为变性温度10-60秒，然后杂交温度10-60秒，终点为延伸温度10-60秒；在杂交阶段，靶基因与探针、引物基于序列互补进行杂交结合，在延伸阶段，杂交的探针和引物以靶基因为模板在Taq-DNA多聚酶的催化作用下进行多聚酶链反应，使探针和引物得到延伸，在变性阶段，探针-靶基因、引物-靶基因杂合物解离，随温度循环次数的增加，样品中靶基因浓度增大，与探针结合的靶基因量扩增，使电极表面质量增加而各检测位点的频率发生变化，在温度循环全过程中监测频率变化，将第一个杂交阶段的频率变化即本底噪声设置为频率变化的域值，当频率变化超过域值时，停止温度循环，根据频率变化达到域值所需的循环次数与样品中靶基因浓度的对数存在的线性关系，用外标准曲线对靶基因进行定量分析。