Verfahren, Vorrichtung und farbstoffmarkiertes Peptid zum Nachweis eines Moleküls, sowie Verfahren zur Herstellung eines farbstoffmarkierten Peptids und dessen Verwendung

摘要

Das Verfahren ist bei einem Ausführungsbeispiel in der Lage, einen Tumormarker (32) des Mammakarzinoms zu detektieren, nämlich das für das Mammakarzinom spezifische, unterglykosilierte MUC1-Glykoprotein (32). Dazu wird einer Patientin eine Blutprobe abgenommen, aus der das Serum separiert wird. Das Serum wird in eine Reaktionsmulde einer Mikrotiterplatte gefüllt. Die elektrische Nettoladung immunogener Epitope des Tandemrepeats von MUC1-Glykoprotein (32) wird durch drei zusätzliche Lysinreste, die bei neutralem oder leicht basischem pH-Wert positiv geladen sind, derart verändert, daß die veränderten MUC1-Epitope (34) bei neutralem oder leicht basischem pH-Wert einfach positiv geladen sind. Ferner wird für einen optischen Nachweis ein Farbstoff an die veränderten MUC1-Epitope gekoppelt. Zuckerspezifische, monoklonale anti-MUC1 Antikörper (58) werden mit den veränderten MUC1-Epitopen beladen und dem Serum zugegeben. Die beladenen Antikörper sind negativ geladen. Im Serum verdrängen die Tumormarker teilweise die veränderten MUC1-Epitope aus den Antigen-Bindungsstellen der monoklonalen anti-MUC1 Antikörper. Der Antigen-Antikörper-Komplex aus MUC1-Tumormarker und monoklonalem anti-MUC1 Antikörper ist ebenfalls negativ geladen, während die freigesetzten veränderten MUC1-Epitope positiv geladen sind. Für den Nachweis wird ein elektrisches Feld zwischen einer Anode und einer Kathode durch das Serum geführt. Die farbstoffmarkierten und freigesetzten veränderten MUC1-Epitope ...