用调控方法培养体细胞胚获得人工种子贮藏的方法

摘要

采用我们发明的调控培养方法，使悬浮培养中的体细胞胚生长发育延缓，获得呼吸较低，胚根生长受抑制的静止状态的体细胞胚。其特点是胚的细胞排列致密硬度增大；贮存物质积累增多，抗逆性强；脱水至含水量为50％左右，贮存4个月植株转换率为78％；脱水至含水量17％，贮存4个月植株转换率为67％；经贮存后的胚生长的植株较常规培养的体细胞胚生长的植株健壮。这种静止状态的体细胞胚具有耐贮藏容积小，无需特殊条件控制等优点，为人工种子贮存问题开辟了新途径。

主权项

1、一种用调控方法培养体细胞胚获得人工种子贮藏的方法，其特征在于所述方法包括：(1)取材日本商用胡萝卜(Daucas carotaL·)品种日本国分大长人参；(2)愈伤细胞的诱导，将胡萝卜种子表面消毒后，播种在1/2MS琼脂培养基上发芽，取5-7日龄实生苗的下胚轴和子叶，切成3-4mm的片段，接种在附加有1.5-2.0mg/L，2.4-D的MS固体培养基上诱导愈伤细胞；(3)正常的悬浮培养，取上述(2)中诱导8-12天膨大切段作起始材料，按每瓶6-8切段的接种量转接在装有35ml的20-35S培养基(含20-35克/升蔗糖的MS无激素培养基)的三角瓶中，在24-27℃下，以90-100rpm的转速振荡培养。每隔6-8天更换一次新鲜培养基；(4)调控培养，按上述(3)培养10-20天后，当球形胚出现时，转入高蔗糖40-90(即每升含40-90克蔗糖的MS无激素培养基)的培养基中进行调控培养，其他培养条件同上述(3)，每隔6-8天更换一次培养基；(5)收获静止状态胚，按上述(4)调控培养50-90天后及时收获，用无菌滤纸将体细胞胚(包括初级体细胞胚和次生体细胞胚)吸干，放置无菌瓶中，用封口膜封住瓶口在室温或冰箱3-6℃贮存，供制作人工种子或胚播种使用。