一种改性聚乙二醇‑酒石酸钠双水相萃取分离提纯木瓜蛋白酶的方法

摘要

本发明提供了一种改性聚乙二醇‑酒石酸钠双水相萃取分离提纯木瓜蛋白酶的方法，将木瓜汁采用反复冻融的方法破壁后收集上层清液得到木瓜蛋白酶粗提液，再向粗提液中加入改性聚乙二醇和酒石酸钠，经双水相萃取后分层，取上相置于截留相对分子质量为10000的透析膜中透析15‑20小时后得木瓜蛋白酶水溶液，再于‑15～‑10℃冷冻干燥8～15小时得木瓜蛋白酶粉末，其中改性聚乙二醇酯中的PEG平均分子量为600、1000或2000。本发明选用的双水相体系对木瓜蛋白酶的选择性高，体系分相速度快，不需借助离心机等设备即可快速分相，操作简便，设备常规，适合工业化生产，所得木瓜蛋白酶产品聚源较高纯度和收率。

主权项

一种改性聚乙二醇‑酒石酸钠双水相萃取分离提纯木瓜蛋白酶的方法，其特征在于，所述分离提纯木瓜蛋白酶的方法包括如下步骤：(1) 粗提液制备：将木瓜乳汁加入水中浸泡4‑6小时后，于‑20℃下冷冻3‑8小时后，再于25℃融化，如此反复冻融3~4次破壁，再将所得溶液离心处理后，收集上清液即为含木瓜蛋白酶的粗提液；(2) 双水相萃取：向步骤(1)所得含木瓜蛋白酶的粗提液中加入改性聚乙二醇和酒石酸钠，震荡混合后，静置15‑30分钟，收集上相；(3) 成品制备：将步骤(2)所得上相在截留相对分子质量为10000的透析膜中透析15‑20小时后得木瓜蛋白酶水溶液，再于‑15 ~ ‑10℃冷冻干燥8~15小时得木瓜蛋白酶粉末；步骤(2)中所述改性聚乙二醇为辛酸部分酯化聚乙二醇。