联合制备CAR‑NK细胞和CAR‑NKT细胞的方法

摘要

本发明公开了一种联合制备CAR‑NK细胞和CAR‑NKT细胞的方法，该方法包括以下步骤：1)将外周血单个核细胞加入细胞培养基中，预活化其中的NK细胞和NKT细胞，再选择性体外活化扩增NK细胞和NKT细胞；2)用携带有嵌合抗原受体的基因序列的慢病毒载体转导步骤1)所得混合细胞。该方法使用健康供者的NK和NKT可以进行标准化和批量化制备；另外本申请中NK细胞和NKT细胞的纯度无需纯化即可分别达到60％和30％以上，因此可以避免预先纯化；使用该方法联合制备的CAR‑NK细胞和CAR‑NKT细胞可通过临床用药来控制其在体内的活化增殖程度及存续时间。

主权项

一种联合制备CAR‑NK细胞和CAR‑NKT细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)从患者的自体外周血、健康供者的外周血或婴儿脐带血中分离得到外周血单个核细胞(PBMC)；将所得外周血单个核细胞加入可用于淋巴细胞、树突状细胞或DC细胞的无血清细胞培养基中，再全部转移到培养瓶中，所述培养瓶含滋养细胞或所述培养瓶被抗CD16单克隆抗体或抗CD52单克隆抗体包被，在所述培养瓶中进行外周血单个核细胞中的NK细胞和NKT细胞的预活化，之后再加入IL‑2和/或IL‑15进行NK细胞和NKT细胞的选择性体外活化扩增，得到包含NK细胞和NKT细胞的混合细胞；2)用携带有嵌合抗原受体的基因序列的慢病毒载体转导步骤1)所得包含NK细胞和NKT细胞的混合细胞，即得包含CAR‑NK细胞和CAR‑NKT细胞的混合细胞，其中嵌合抗原受体与靶向表面抗原可特异性结合。