一种快速检测钩虫病感染的免疫层析试条及其制备方法

摘要

本发明一种快速检测钩虫病感染的免疫层析试条，包括：样品垫、紧密连接于样品垫的含有胶体金标记探针的金标垫、与金标垫紧密连接的纤维素膜和紧密连接于纤维素膜另一端的吸水垫；纤维素膜上远离金标垫的一端设置质控线，在质控线和金标垫之间的纤维素膜上设置检测线，检测线由钩虫纯化虫体抗原组成，钩虫纯化虫体抗原为来源于美洲钩虫成虫虫体的可溶性抗原液；胶体金标记探针为金黄色葡萄球菌A蛋白或链球菌G蛋白；质控线由特异性结合胶体金标记探针的抗体组成。本发明还提供了上述的免疫层析试条的制备方法。本发明的免疫层析试条具有简便性、敏感性、特异性和快速性的优点，可以同时应用于人、畜及野生动物的临床和现场使用。

主权项

一种快速检测钩虫病感染的免疫层析试条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)一个制备钩虫纯化虫体抗原溶液的步骤，收集美洲钩虫成虫1000～2000条，用磷酸缓冲液反复洗涤，将虫体置于预冷的研钵内，不断倒入液氮充分研磨，再加入虫体压积15～25倍体积的浸泡液浸泡冲洗虫体，所述的浸泡液由正辛基葡糖苷、苯甲基磺酰氟、甲苯磺酰赖氨酰氯甲酮、乙二胺四乙酸、乙二醇双(2‑氨基乙醚)四乙酸组成，在所述的浸泡液中，正辛基葡糖苷的质量百分比浓度为1.5％，所述的苯甲基磺酰氟的浓度为1mM、所述的甲苯磺酰赖氨酰氯甲酮的浓度为0.2mM，所述的乙二胺四乙酸的浓度为1mM，所述的乙二醇双(2‑氨基乙醚)四乙酸的浓度为1mM，然后在液氮和30～40℃反复冻融5～8次，冰浴过夜，离心，上清液在磷酸缓冲液中透析48～72小时，透析完成后，在溶液中加入硫酸铵至60～75％的饱和度并产生沉淀，冰浴过夜，离心，弃上清，沉淀用磷酸缓冲液复溶，在磷酸缓冲液中透析10～20小时，回收透析液，离心，上清即是钩虫纯化虫体抗原可溶性抗原，将钩虫成虫虫体可溶性抗原液蛋白浓度调整到1～20mg/mL；2)一个制备胶体金标记探针的步骤，将1～5mg金黄色葡萄球菌A蛋白或链球菌G蛋白加入100mL胶体金溶液中，离心取沉淀，复溶到4～25mg/mL；3)一个制备与胶体金标记探针特异结合的抗体的步骤，所述的胶体金标记探针特异结合的抗体特异性的结合金黄色葡萄球菌A蛋白或链球菌G蛋白，将与胶体金标记探针特异结合的抗体的溶液浓度调整到0.1～5mg/mL；4)将钩虫纯化虫体抗原溶液喷到纤维素膜上形成检测线，将能与胶体金标记探针特异结合的抗体溶液喷到所述纤维素膜的另一区域形成质控线；5)将玻璃纤维膜或聚脂膜浸入胶体金标记探针溶液，制备金标垫，向胶体金标记探针溶液中添加质量百分比浓度为5％～20％的蔗糖，将金标垫在25～40℃下干燥0.5～1小时，再与纤维素膜粘贴；6)上述纤维素膜在喷有检测线、质控线后，先在25～40℃下干燥0.5～2小时，再粘贴吸水垫，将吸水垫粘贴在所述纤维素膜的远离检测线的一端，将金标垫粘贴在纤维素膜的靠近检测线的一端，将样品垫粘贴于金标垫上与所述纤维素膜相对的一端。