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一种不同基底硬度体外细胞培养平台的建立方法，其特征在于，具体步骤包括：改变单体丙烯酰胺和交联剂的比例，制备系列不同硬度的聚丙烯酰胺凝胶，并在其表面包被一层I型胶原蛋白，形成不同基底硬度体外细胞培养平台；其中，所述的制备系列不同硬度的聚丙烯酰胺凝胶的具体步骤为：第一步：取两块玻璃板，清洗干净，晾干，灭菌；将两块玻璃板固定，之间形成0.5‑1.5mm的无菌间隙；将单体丙烯酰胺、交联剂N,N'‑亚甲基双丙烯酰胺、氧化剂过硫酸铵、催化剂四甲基乙二胺、缓冲液以及水混合，制备无菌聚丙烯酰胺凝胶溶液，单体丙烯酰胺的用量为10vol%，交联剂N,N'‑亚甲基双丙烯酰胺的用量为0.01vol%‑0.50vol%；将无菌聚丙烯酰胺凝胶溶液注入玻璃板之间的无菌间隙中，将玻璃板以及其中的无菌聚丙烯酰胺凝胶溶液移入35‑40℃孵育箱中，静置2‑4小时，形成厚度为0.5‑1.5mm的聚丙烯酰胺凝胶；第二步：改变无菌聚丙烯酰胺凝胶溶液中单体丙烯酰胺和交联剂N,N'‑亚甲基双丙烯酰胺的比例，重复进行第一步，形成系列不同硬度的聚丙烯酰胺凝胶；所述的在聚丙烯酰胺凝胶表面包被一层I型胶原蛋白的具体步骤为：将聚丙烯酰胺凝胶分割成适宜大小，放置于六孔板或培养皿中，在凝胶表面滴加I型胶原蛋白，并用无菌TIP头将液滴摊平，常温静置1‑2小时，向六孔板或培养皿中加入1%乙醇胺溶液，以浸过凝胶表面为宜，0‑10℃静置10‑60分钟，弃去乙醇胺，加入无血清培养基，0‑10℃静置过夜，备用。 |
