一种成纤维细胞的快速提取方法及应用

摘要

本发明公开了一种成纤维细胞的快速提取方法。包括以下步骤：S1）取离体的肿瘤组织，剪碎，加入胶原酶溶液进行消化；S2）转移到离心管中进行震荡、孵育及离心后，取沉淀物放进细胞培养箱中培养；S3）再加入胶原酶溶液进行消化，并重复步骤S2），得到经交替消化、培养后的组织结构松散的肿瘤组织；S4）加入胰酶溶液，常温静置后加入胎牛血清终止消化，再将悬浮物倒掉，得到胰酶消化后贴壁的肿瘤单细胞；S5）加入DMEM完全培养基进行传代培养，得到所述肿瘤相关成纤维细胞。还提供了本发明提取方法的应用，利用本提取方法得到的成纤维细胞纯度非常高，成纤维细胞高表达FAP，表达率为99.2%，适合医学推广。

主权项

一种成纤维细胞的快速提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1）取离体的肿瘤组织，剪碎，然后往剪碎后的肿瘤组织中加入胶原酶溶液进行消化，得到胶原酶消化后的肿瘤组织；S2）将所述胶原酶消化后的肿瘤组织转移到离心管中进行震荡、孵育及离心后，取沉淀物放进细胞培养箱中培养，得到组织结构松散的肿瘤组织；S3）再加入胶原酶溶液进行消化，并重复步骤S2），得到经交替消化、培养后的组织结构松散的肿瘤组织；S4）向步骤S3）所述组织结构松散的肿瘤组织中加入胰酶溶液，常温静置后加入胎牛血清终止消化，再将悬浮物倒掉，得到胰酶消化后贴壁的肿瘤单细胞； S5）在所述胰酶消化后贴壁的肿瘤单细胞中加入DMEM完全培养基进行传代培养，得到所述肿瘤相关成纤维细胞。