高纯超螺旋结构Ⅰ型胶原蛋白的快速制备方法

摘要

本发明公开了高纯超螺旋结构Ⅰ型胶原蛋白的快速制备方法，方法包括选取主要含有Ⅰ型胶原蛋白的鱼鳞作为原料，经碱处理，酸处理，当提取酸溶性Ⅰ型胶原蛋白，预处理后的鱼鳞添加弱酸溶液作为提取剂，使用匀浆技术提取并伴随搅拌散热以维持提取所需的低温；当提取酶溶性Ⅰ型胶原蛋白，预处理后的鱼鳞添加弱酸溶液作为提取剂，使用匀浆技术提取，加入胃蛋白酶，并伴随搅拌散热以维持提取所需的低温，同时根据鱼鳞残渣的粒径设计不同的过滤工艺；然后将以上两种Ⅰ型胶原蛋白粗提液各自通过膜分离技术纯化，再用冷冻干燥，即得。本发明所制备的胶原蛋白产品，构型明确，三螺旋结构完整，通过SDS-PAGE检测，为电泳纯度≥95％的Ⅰ型胶原蛋白。

主权项

高纯超螺旋结构Ⅰ型胶原蛋白快速制备方法，其特征在于，其步骤如下：(1)原料预处理将鱼鳞投入反应釜中，加入鱼鳞重量2～10倍的碱溶液，搅拌0.5～12小时，除掉鱼鳞的脂肪和杂蛋白等杂质，用水洗净，加入鱼鳞重量2～10倍的酸溶液，搅拌0.5～12小时，再用水洗净，其中碱溶液的质量体积浓度为1～4％，酸溶液的质量体积浓度为3～8％，预处理温度控制在0～25℃之间；(2)Ⅰ型胶原蛋白提取与过滤向预处理后的原料中添加0.05～10mol/L的弱酸作为提取剂，原料与提取剂的重量比为1:1～1:10，同时进行0.5～6小时的匀浆提取，匀浆速度为1000～28000转/分，伴随搅拌散热以维持提取温度为0～10℃；如果提取液中残渣的粒径≥0.5mm，先进行原汁快速榨取，再进行冷冻离心过滤或加压快速过滤；如果提取液中残渣的粒径＜0.5mm，先进行冷冻离心过滤，再进行加压快速过滤；如果不考虑提取液中残渣粒径，则可以直接进行冷冻离心过滤；过滤得到的残渣回收后重复进行提取过滤步骤0～5次，所得的上清液混合汇总，即为酸溶性Ⅰ型胶原蛋白粗提液；向预处理后的原料中添加0.05～10mol/L的弱酸作为提取剂，原料与提取剂的重量比为1:1～1:10，同时加入原料重量0.05％～5％的胃蛋白酶并进行0.5～6小时的匀浆提取，匀浆速度为1000～28000转/分，伴随搅拌散热以维持提取温度为0～10℃，如果提取液中残渣的粒径≥0.5mm，先进行原汁快速榨取，再进行冷冻离心过滤或加压快速过滤；如果提取液中残渣的粒径＜0.5mm，先进行冷冻离心过滤，再进行加压快速过滤；如果不考虑提取液中残渣粒径，则可以直接进行冷冻离心过滤；过滤得到的残渣回收后重复进行提取过滤步骤0～5次，所得的上清液混合汇总，即为酶溶性Ⅰ型胶原蛋白粗提液；(3)Ⅰ型胶原蛋白分离纯化膜分离工艺技术纯化酸溶性Ⅰ型胶原蛋白粗提液或酶溶性I型胶原蛋白粗提液，粗提液先用孔径为1～0.2μm的微滤膜去除肉眼未见的细微残渣或可能的热原，透过液再用孔径为0.1～0.05μm或相对分子量为150KD～100KD的超滤膜去除残余的胃蛋白酶、小分子杂质和无机盐，浓缩得到电泳纯度≥95％，具备三螺旋结构的高纯酸溶性I型胶原蛋白溶液或高纯酶溶性I型胶原蛋白溶液；(4)Ⅰ型胶原蛋白冷冻干燥冷冻干燥热敏性的酸溶性Ⅰ型胶原蛋白溶液，得到高纯超螺旋结构酸溶性Ⅰ型胶原蛋白成品；冷冻干燥热敏性的酶溶性Ⅰ型胶原蛋白溶液，得到高纯超螺旋结构酶溶性Ⅰ型胶原蛋白成品。