主权项 |
一种小蝉草(<i>Cordyceps</i><i> sobolifera</i>)菌丝体及胞外多糖的液体培养方法,其特征包括以下的步骤:第一步: 将小蝉草接种在PDA培养基上,20‑25<sup>o</sup>C下进行暗培养,使菌落直径长至4‑6cm,得到斜面菌种;第二步:第一步得到的斜面菌种,在经灭菌的研钵里,加入适量无菌水进行研磨,接种至液体种培养基,20‑28<sup>o</sup>C下振荡培养,培养7‑10天,至菌丝球充满全部培养基,得到液体菌种,所述的液体种培养基pH6.0‑6.5,每1000mL培养基中含有葡萄糖10‑20g, 蛋白胨1‑5g,牛肉浸膏1‑4g,酵母浸膏0.5‑1g;第三步:将第二步得到的液体菌种接种到液体培养基进行培养,所述的生产用液体培养基pH5.0‑8.5,每1000mL培养基中含有葡萄糖10‑20g, 蛋白胨1‑5g,牛肉浸膏1‑4g,酵母浸膏0.5‑1g,其余为水;第四步:第三步的液体培养可采用两种方式进行,一为振荡培养,另一为搅拌培养。振荡培养方式:将以上液体菌种(步骤2)按接种量5%‑15%(V/V)的比例,接种至液体培养基(同菌种液体培养基GPBY),100‑180r/min,培养4‑7天,至菌丝球充满全部培养基;搅拌培养方式为按比例接入适量的液体菌种后,利用磁力搅拌器进行培养,培养室温度设置为20‑28<sup>o</sup>C下,培养时间4‑7天;第五步:将第四步中的培养物进行菌丝体和培养液的分离,采用离心法或过滤法收集菌丝,菌丝(湿重)得率为70‑100g/L;在40‑60<sup>o</sup>C下烘干菌丝,菌丝(干重)产率5‑8 g/L;离心得的上清液或过滤得的滤液直接加入适量酒精进行多糖沉淀,或进行浓缩后再进行多糖沉淀,最后利用离心的方法收集多糖,多糖经40‑50<sup>o</sup>C下烘干或冷冻干燥,得率为0.5‑1.2g/L。 |