一种插田泡组织培养与快速繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种插田泡组织培养与快速繁殖的方法，依次包括以下步骤：（1）插田泡茎段的消毒和接种：取当年抽出的插田泡新茎，剪成带腋芽的中度木质化茎段进行接种；（2）丛生芽的诱导；（3）不定芽的增殖；（4）再生植株的生根培养；（5）炼苗移栽。在上述步骤中采用了不同成分及配比的培养基。采用本发明的方法，能够快速地获得插田泡植株，利于产业化生产。采用本发明方法，插田泡丛生芽的不定芽诱导率高达92.5%，不定芽增殖倍数可达7.2，植株移栽成活率可达95%以上。

主权项

一种插田泡组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于依次包括以下步骤：（1）插田泡茎段的消毒和接种取当年抽出的插田泡新茎，剪成带腋芽的茎段，选取木质化程度为中度的茎段，先用牙刷于自来水下轻柔刷洗，加入适量的洗洁精溶液浸泡2‑4 min，用流水冲洗0.5 h后，在超净台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡2 min，用无菌水冲洗3次，浸入滴加有5滴吐温‑80的0.1% HgCl₂溶液内浸泡消毒13‑14 min，然后用无菌水充分浸洗3次，以正常的极性方向接种到添加有TDZ 0.5 mg/L，6‑BA 2.0 mg/L的WPM基本培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为7.0 g/L， pH为5.8‑6.0，培养基置于121℃下高温高压灭菌20 min；接好外植体的培养基先置于黑暗中10 h，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30‑40 μmol/(m²·s)；30 d后统计发现，污染率低于10%，外植体成活率在80%以上；（2）丛生芽的诱导选取当年抽出的新茎中的中度木质化茎段，先用牙刷于自来水下轻柔刷洗，加入适量的洗洁精溶液浸泡2‑4 min，用流水冲洗0.5 h后，在超净台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡2 min，用无菌水冲洗3次，浸入滴加有5滴吐温‑80的0.1% HgCl₂溶液内浸泡消毒13‑14 min，然后用无菌水充分浸洗3次，以正常的极性方向接种到添加有TDZ 0.5 mg/L，6‑BA 2.0mg/L ，IAA 0.5 mg/L，CH 0.1‑0.2 mg/L的WPM基本培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为7 g/L， pH为5.8‑6.0，培养基置于121℃下高温高压灭菌20 min；接好外植体的培养基先置于黑暗中10 h，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30‑40 μmol/(m²·s)；30 d后统计发现，不定芽诱导率在92.5%，不定芽数在5.4，而且不定芽叶色浓绿，生长良好，株高和茎粗适中；（3）不定芽的增殖将上一步诱导获得的不定芽丛切成2‑3株不定芽的芽块，接种到添加有TDZ 0.3 mg/L ，6‑BA 1.0 mg/L ， IAA 1.0 mg/L，CH 0.1‑0.2 mg/L的WPM基本培养基中进行培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30‑40 μmol/(m²·s)；30 d后统计发现，增殖倍数在7.2，且无玻璃化苗，植株粗壮，且生长较快；（4）再生植株的生根培养切取叶片嫩绿、生长旺盛且2~3 cm高的不定芽，插入到50‑100%WPM，NAA 0.1 mg/L ，IAA 0.2 mg/L，AC 0.1 ‑0.2 mg/L的生根培养基中，培养基中添加的蔗糖为10‑50 g/L，琼脂添加量为7.0 g/L，pH 5.8‑6.0；30 d时统计发现，生根率在95%以上，根数4.6根，根粗适中，适于炼苗移栽；其中50‑100%WPM指的是培养基中WPM基本培养基的浓度；50% WPM就是指WPM基本培养基配方里的所有物质用量为原来的1/2；（5）炼苗移栽待生根的组培苗的苗高长至5 cm以上，根长超过5 cm时，松开组培瓶的瓶盖，往瓶中注入少量清水，防止培养基干裂，但先不移开瓶盖，12 h后半挪开瓶盖，再过12 h，移走瓶盖，让灯光直照再生植株培养2 d；然后小心地将培养基捣碎，拿出再生植株，用水小心将残留的琼脂洗净，将植株定植于珍珠岩，泥炭重量比为 1： 5的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保湿，室内温度控制在24‑28℃之间；待新叶长出，揭开薄膜并叶面喷雾保持湿润，适应3‑5 d后移栽大田中。