从尿液中分离肿瘤细胞来源的外泌体的方法

摘要

本发明公开了从尿液中分离肿瘤细胞来源的外泌体的方法，依次包括：先对尿液样本进行冻干处理，再使用抽提试剂提取总外泌体，然后使用EpCAM抗体标记磁珠吸附，分离纯化出肿瘤细胞来源的外泌体。本发明方法不仅克服了目前由于提取试剂盒只能提取少量尿液而无法达到大规模筛选或表达检测的实验要求的缺陷，实现了在尿液中获得可检测浓度的外泌体，而且，还克服了现有检测总外泌体肿瘤特异性低的缺陷，从而在尿液中能准确检测到肿瘤来源的外泌体生物信息。本发明方法具有无创取样、特异性强、方便易行、价格低廉、且能直接用于后续检测的优势，具有较高的临床推广应用价值。

主权项

一种从尿液中分离肿瘤细胞来源的外泌体的方法，其特征在于，依次包括以下步骤：(1)将尿液样本收集于第一离心管中，2～8℃、300～500g离心10～15分钟，分离得到上层液体；(2)将所述上层液体进行冷冻干燥，得到沉淀；(3)用缓冲液将所述沉淀进行重悬，得到第一重悬液，其中，所述缓冲液的pH值为7～8；将所述第一重悬液在2～8℃、10000～12000g离心30～40分钟，分离得到上清液；(4)将所述上清液与总外泌体抽提液以2:1的体积比在第二离心管混合，震荡均匀后，2～8℃孵育6～16小时，然后，将孵育后的混合液在2～8℃、10000～12000g离心60～80分钟，移除上层清液后，在所述第二离心管的底部得到固相物质，为尿液总外泌体；(5)用缓冲液将所述尿液总外泌体进行重悬，得到第二重悬液，为尿液总外泌体的重悬液，其中，所述缓冲液的pH值为7～8；(6)将所述第二重悬液加入到吸附有上皮细胞粘附分子抗体标记磁珠的第三离心管中，2～8℃孵育6～16小时；(7)将所述第三离心管置于磁力架，吸附2～10分钟，移除管内液体，在所述第三离心管中得到磁珠结合的肿瘤细胞来源的外泌体。