H7N9禽流感病毒二重荧光定量RT-PCR检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种H7N9禽流感病毒二重荧光定量RT-PCR检测试剂盒。发明人针对H7亚型禽流感病毒HA基因和N9亚型禽流感病毒NA基因保守序列，分别设计了PCR引物和荧光TaqMan探针，构成专门针对H7亚型和N9亚型禽流感病毒的引物组和探针组，组合成二重荧光定量RT-PCR检测试剂盒，既可确定单个H7亚型或N9亚型禽流感病毒感染，也可一管检测即可确定是否为H7N9禽流感病毒感染，且相互间没有干扰，进一步提高了检测的敏感性和特异性。本发明及其检测方法充分利用了PCR技术的高扩增性、良好的特异性和荧光检测技术的快速敏感性，反应结束即时便可根据扩增曲线判定是否为H7N9禽流感病毒感染。

主权项

一种H7N9禽流感病毒二重荧光定量RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于包括引物组和探针组；引物组有引物1至4，它们分别是序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.4的碱基序列；探针组有探针A和探针B，它们分别是序列表SEQ.ID.No.5至SEQ.ID.No.6的碱基序列；该试剂盒包括反转录反应液、PCR反应液、DEPC水和超纯水；所述反转录反应液每管16μL，含有5×Reverse Transcriptase Buffer 10μL、50pmol9mer Random Primer 2μL、10mM dNTP Mixture 2μL、40U Ribonuclease Inhibitor 1μL和5U/μL AMV Reverse Transcriptase 1μL；所述PCR反应液每管11.4μL，含有2×Premix Ex Taq 10μL，20μM H7亚型禽流感病毒正向、反向引物和TaqMan探针分别0.2μL、0.2μL、0.4μL，20μM N9亚型禽流感病毒正向、反向引物和TaqMan探针各0.2μL；所述DEPC水和超纯水各1mL。