水蛭指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

摘要

本发明提供了一种水蛭指纹图谱的建立方法，具体步骤为将水蛭制备成供试品溶液，在一定的条件下经过高效液相色谱仪的分离检测，获得水蛭的指纹图谱。本发明同时提供了由该方法得到的水蛭的标准指纹图谱，该图谱能够为水蛭鉴别和内在的质量控制提供可靠的依据。本发明操作简便，稳定性高、重现性好、特征峰多，能全面、准确地评价水蛭药材的质量。

主权项

水蛭指纹图谱的建立方法，其特征在于将水蛭制备成供试品溶液，经过高效液相色谱仪分离检测，获得水蛭的指纹图谱；所述方法包括如下步骤：1）供试品溶液的制备：取水蛭粗粉，以甲醇溶液回流提取，离心，取上清液加在碱性氧化铝层析柱上，收集过柱液，再以水洗脱，合并过柱液及水洗脱液，过滤，作为供试品溶液；2）参照物溶液的制备：取尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、水蛭胺C、水蛭胺B、水蛭胺A对照品，溶于甲醇溶液作为参照物溶液；3）水蛭指纹图谱的制作：分别精密吸取供试品溶液和参照物溶液，经高效液相色谱仪分离检测，检测条件为：色谱柱为YMC‑Pack‑ODS‑AQ C₁₈柱，250mm×4.6mm，5µm；流动相为10mmol/L的磷酸二氢钾溶液—乙腈；采用梯度洗脱：0min→15min→40min→60min，乙腈0%→0%→20%→20%；流速0.8ml/min；检测波长254nm；进样量10µl；柱温30℃；记录60分钟色谱图，得到水蛭的指纹图谱。