一种古代丝织品的检测方法

摘要

本发明公开了一种古代丝织品的检测方法，采用间接酶联免疫的方法对丝织品丝肽成分进行了检测，即将丝织品文物洗脱液包被到酶标板上，然后添加兔抗丝素蛋白抗体与抗原结合形成抗原抗体复合物。洗涤后加入碱性磷酸酯酶标山羊抗兔IgG（H+L）抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物，洗涤加入四甲基联苯胺溶液，底物被酶催化为有色产物，根据产物颜色变化的深浅可进行定性分析。由于酶的催化效率极高，间接方法了免疫反应的结果，使测试具有较高的灵敏度。

主权项

一种古代丝织品的检测方法，其特征在于采用如下步骤：A)溶液的配制：PBS 7.4缓冲液配制：KCl 0.2g，KH₂PO₄ 0.27g，NaCl 8.0g，Na₂HPO₄ 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至7.4；PBS 9.6缓冲溶液配制：Na₂CO₃ 0.15g，NaHCO₃ 0.29g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至9.6；B)将0.001g‑0.01g丝素蛋白粉和0.01g‑0.1g文物样分别溶解于10‑1000ml PH为9.6的PBS缓冲溶液中，混合搅拌均匀，静置，分别取50‑120μl上清液加入到酶标板中，形成阳性对照和实验对照；取50‑120μl PH为7.4的PBS缓冲溶液作为空白对照用；阴性对照为不加兔抗丝素蛋白一抗，其包被液和阳性对照设为一样；然后将各阴性对照，阳性对照，实验组各放置于4℃冰箱中12h；C)各孔中加入质量浓度1%牛血清白蛋白溶液100‑300μl；37℃下封闭1‑2h；然后将溶液吸出，用PH为7.4的PBS缓冲溶液洗涤3次，每次3min；D)取用质量浓度1%牛血清白蛋白溶液稀释1000‑12000倍的兔抗丝素蛋白抗体50‑120μl，加入到酶标板中，保鲜膜封板，37℃下孵育1h；然后将溶液吸出，用PH为7.4的PBS缓冲溶液洗涤5次，每次3min；E)各孔中加入3000‑10000倍稀释的磷酸酯酶山羊抗兔IgG（H+L）抗体50‑120μl；37℃下孵育1h；然后将溶液吸出，用PH为7.4的PBS缓冲溶液洗涤5次，每次3min；F)各孔内加底物液1%的四甲基联苯胺溶液100μl，置黑暗处使其反应10min；G)各孔内加1 mol/L H₂SO₄ 溶液50‑120μl，终止反应；H)将酶标板置于酶标仪中，读取λ=450nm处的吸光度数值；比较阳性对照，阴性对照与实验组测得的OD值；若OD_实验组/OD_阴性对照＞2.1，则证明所检测的样品呈现阳性，若OD_实验组/OD_阴性对照≤2.1，则证明所测得的样品呈现阴性。