主权项 |
一种乌拉尔甘草与胀果甘草种子的鉴定方法,其特征在于按如下的步骤进行: (1)酶液的制备:取待鉴定的甘草种子,在自来水中浸泡6‑8小时,在室温下置于器皿中,保持湿润令其发芽,待胚根长到1‑1.5cm时,按照1g样品加入1ml电极缓冲液研磨,在0‑4℃下,以10000转/分钟,离心10分钟,上清液即为SOD提取液;所述的电极缓冲液指的是pH 8.3的电极缓冲液;(2)制凝胶板:将玻璃板洗净放好封胶条,装入电泳槽,插入楔板;然后灌胶:先灌分离胶,用水封住,待出现界限后,吸干水封,再灌入浓缩胶,插入梳子,待浓缩胶凝固后,拔去梳子,去掉封胶条,重新装好电泳槽;其中分离胶与浓缩胶的配制如下:<img file="603782dest_path_image002.GIF" wi="541" he="135" />(3)点样与电泳 :取步骤1的上清液30微升,加入相应的泳道中;然后先用100v电压,电泳20分钟,待溴酚蓝指示剂走出浓缩胶后改为140V电压,电泳1小时10分钟,待溴酚蓝指示剂即将走出凝胶板时停止电泳,取出凝胶板,进行SOD同工酶染色;(4)SOD同工酶染色方法:电泳结束后,取出凝胶板,在黑暗条件下用2.45×10<sup>‑3</sup>mol/L NBT溶液浸泡20分钟,然后再在核黄素溶液中,在黑暗条件下浸泡15分钟,最后浸泡在EDTA—Na<sub>2</sub> pH7.8的磷酸缓冲液,用200W白炽灯照光,至背景显出蓝色或者紫褐色,同时出现无色透明条带为止,立刻照相或保存于8%乙酸中,即可得待测样品的SOD同工酶酶谱;(5)品种确认:将待测种子的SOD同工酶酶谱与标准酶谱相比较得出鉴定结果。 |