花曲柳悬浮培养体系的建立方法

摘要

本发明属于细胞工程技术领域。具体涉及一种花曲柳(Fraxinus rhynchophylla Hance.)愈伤组织团块悬浮培养体系的建立方法。本发明以优良花曲柳茎段和叶片作为原始材料，在添加了激素NAA和TDZ的WPM固体培养基上诱导出愈伤组织，将愈伤组织接种到添加了激素NAA和TDZ的WPM液体培养基中，光照振荡培养。经过多代定向诱导驯化，建立了生长量稳定，增殖迅速，团块均匀的愈伤组织团块悬浮系。本发明具有方法简单易行，操作性强，增殖系数可观，能够促进花曲柳的快速繁殖的特点。

主权项

一种花曲柳(Fraxinus rhynchophylla Hance.)愈伤组织团块悬浮体系建立的方法，其特征在于它包括如下步骤： （1）外植体制备 材料消毒：在超净工作台上将取下的花曲柳茎段和叶片在75%酒精浸泡25‑30s，无菌水冲洗2次，每次5分钟，置入饱和Ca(ClO)₂水溶液处理8‑12min，用无菌水冲洗4‑6次，每次5分钟，无菌滤纸上吸干； （2）愈伤组织诱导 将（1）处理好的花曲柳茎段(或叶片)切割成0.5‑1cm(或cm²)左右的小段(或块)，接入诱导愈伤组织培养基中诱导愈伤组织； （3）悬浮培养体系建立 将（2）获得的愈伤组织切割成0.5‑1cm³，接种到适合悬浮细胞生长的液体培养基中，置于转速为110‑140r/min的摇床上，温度23‑26℃，每天光照16h，培养7‑14d继代一次。