一种提取线粒体中多聚核糖体的方法及其应用

摘要

本发明公开了一种提取线粒体中多聚核糖体的方法及其应用。提取线粒体中多聚核糖体的方法包括如下步骤：用线粒体提取缓冲液提取靶细胞的线粒体；再核糖体提取缓冲液裂解得到线粒体核糖体悬液；线粒体核糖体悬液分两等份，其中一份用RNA酶处理，另外一份不做处理作为对照；配制10-30%蔗糖密度梯度，平衡后将线粒体核糖体悬液铺在蔗糖密度梯度上层，4℃180000×g离心2-4小时；从上到下收集各离心组分，提取各组分的RNA和蛋白质进行分析确定多聚核糖体所在组分。本发明可以清楚明了的检测到线粒体中的多聚核糖体，并且对多聚核糖体组分中的线粒体mRNA进行定量分析，得到待研究线粒体基因的翻译水平。

主权项

一种提取线粒体中多聚核糖体的方法，其特征在于包含如下步骤：（1）用线粒体提取缓冲液提取靶细胞的线粒体；（2）线粒体用核糖体提取缓冲液裂解得到线粒体核糖体悬液；（3）线粒体核糖体悬液分两等份，其中一份用RNA酶处理，另外一份不做处理作为对照；（4）配制10‑30%蔗糖密度梯度，平衡后将线粒体核糖体悬液铺在蔗糖密度梯度上层，4℃ 180000×g离心2‑4小时；（5）从上到下收集各离心组分，提取各组分的RNA和蛋白质，通过逆转录定量PCR分析线粒体核糖体大亚基RNA组分和小亚基RNA组分和免疫印迹检测线粒体核糖体蛋白亚基MRPS27、MRPL24，根据用RNA酶处理的组分和未用RNA酶处理组分中MRPS27、MRPL24含量的不同来确定多聚核糖体所在组分。