一种多靶标特异性核酸适体的富集方法

摘要

本发明公开了一种多靶标特异性核酸适体的富集方法。包括如下步骤：1）将待富集核酸文库与非靶细胞孵育，得到与非靶细胞不结合的核酸分子1；2）将核酸分子1依次与N种靶细胞孵育，收集与各靶细胞结合的核酸分子作为下轮待富集文库，重复步骤1）、2），使与N种靶细胞中至少一种特异结合的核酸分子富集；3）将步骤2）富集产物与非靶细胞孵育，得到与非靶细胞不结合的核酸分子2；4）将核酸分子2与N种靶细胞循环孵育，以与前一靶细胞结合的核酸分子作为与下一靶细胞孵育的核酸文库，依次与所有靶细胞孵育，重复步骤3）、4），使与N种靶细胞均特异结合的核酸分子富集。该方法富集的核酸适体高亲和多种靶细胞，在肿瘤诊断中应用前景很大。

主权项

一种多靶标特异性核酸适体的富集方法，包括如下步骤：（1）将待富集核酸文库与非靶细胞孵育，分离去除与所述非靶细胞结合的核酸分子，得到与所述非靶细胞不结合的核酸分子；（2）为如下a）或b）：a）依次进行如下a1）和a2）：a1）将步骤（1）得到的与所述非靶细胞不结合的核酸分子与靶细胞1共同孵育形成孵育体系1，吸出所述孵育体系1中不含所述靶细胞1的液体，将其命名为孵育液1，所述孵育液1中含有与所述靶细胞1不结合的核酸分子；将所述孵育液1与靶细胞2共同孵育，形成孵育体系2，吸出所述孵育体系2中不含所述靶细胞2的液体，将其命名为孵育液2，所述孵育液2中含有与所述靶细胞2不结合的核酸分子；a2）洗涤步骤a1）中孵育后的2种靶细胞，对洗涤后的与所述2种靶细胞结合的所述待富集核酸文库中的核酸分子进行扩增，获得扩增产物，使与所述2种靶细胞中的至少一种特异结合的核酸分子得到富集；b）依次进行如下b1）和b2）：b1）将步骤（1）得到的与所述非靶细胞不结合的核酸分子与靶细胞1共同孵育形成孵育体系1，吸出所述孵育体系1中不含所述靶细胞1的液体，将其命名为孵育液1，所述孵育液1中含有与所述靶细胞1不结合的核酸分子；将所述孵育液1与靶细胞2共同孵育形成孵育体系2，吸出所述孵育体系2中不含所述靶细胞2的液体，将其命名为孵育液2，所述孵育液2中含有与所述靶细胞2不结合的核酸分子；依此类推，直至将孵育液N‑1与靶细胞N共同孵育形成孵育体系N，吸出所述孵育体系N中不含所述靶细胞N的液体，将其命名为孵育液N，所述孵育液N中含有与所述靶细胞N不结合的核酸分子；b2）洗涤步骤b1）中孵育后的N种靶细胞，对洗涤后的与所述N种靶细胞结合的所述待富集核酸文库中的核酸分子进行扩增，获得扩增产物，使与所述N种靶细胞中的至少一种特异结合的核酸分子得到富集；所述N为3以上的自然数；（3）以步骤（2）a2）中得到的扩增产物或步骤（2）b2）中得到的扩增产物作为待富集核酸文库，将所述待富集核酸文库与所述非靶细胞孵育，分离去除与所述非靶细胞结合的核酸分子，得到与所述非靶细胞不结合的核酸分子；（4）为如下c）或d）：c）将步骤（3）得到的与所述非靶细胞不结合的核酸分子与所述靶细胞1共同孵育，收集并洗涤孵育后的所述靶细胞1，对洗涤后的与所述靶细胞1所结合的所述待富集核酸文库中的核酸分子进行扩增，获得扩增产物1，使与所述靶细胞1特异结合的核酸分子得到富集；将所述扩增产物1与所述靶细胞2共同孵育，收集并洗涤孵育后的所述靶细胞2，对洗涤后的与所述靶细胞2所结合的所述待富集核酸文库中的核酸分子进行扩增，获得扩增产物2，使与所述靶细胞1和所述靶细胞2均特异结合的核酸分子得到富集；d）将步骤（3）得到的与所述非靶细胞不结合的核酸分子与所述靶细胞1共同孵育，收集并洗涤孵育后的所述靶细胞1，对洗涤后的与所述靶细胞1所结合的所述待富集核酸文库中的核酸分子进行扩增，获得扩增产物1，使与所述靶细胞1特异结合的核酸分子得到富集；将所述扩增产物1与所述靶细胞2共同孵育，收集并洗涤孵育后的所述靶细胞2，对洗涤后的与所述靶细胞2所结合的所述待富集核酸文库中的核酸分子进行扩增，获得扩增产物2，使与所述靶细胞1和所述靶细胞2均特异结合的核酸分子得到富集；依此类推，直至将扩增产物N‑1与所述靶细胞N共同孵育，收集并洗涤孵育后的所述靶细胞N，对洗涤后的与所述靶细胞N所结合的所述待富集核酸文库中的核酸分子进行扩增，获得扩增产物N，使与所述N种靶细胞均特异结合的核酸分子得到富集；所述N为3以上的自然数。