鉴别分泌型蛋白标志物的系统及方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开了一种鉴别分泌型蛋白或跨膜蛋白的系统。本发明还公开了一种从cDNA文库中鉴别编码分泌型蛋白或跨膜蛋白的cDNA的方法。本发明所述方法具有很高的灵敏度和特异性，可方便地鉴别出一些新的疾病特异性的分泌型蛋白，例如筛选和鉴别肺癌特异性的分泌型蛋白标志物。

主权项

一种鉴别编码分泌型蛋白或跨膜蛋白的cDNA的方法，其特征在于，所述的方法包括： (1)将外源的cDNA片段插入到含有缺失信号序列的蔗糖转化酶基因的表达载体中； 所述的cDNA片段来源于cDNA文库，并且所述的cDNA片段是富集了5’端cDNA的cDNA片段，所述的cDNA文库为疾病相关的细胞或组织的cDNA文库，扣除了一些非该疾病特异性的cDNA，通过差减杂交的方法来进行所述扣除； (2)将步骤(1)获得的表达载体导入不表达有功能的分泌型蔗糖转化酶的酵母细胞中，并在蔗糖作为唯一碳源的培养基上培养，获得能够生长的酵母细胞； (3)鉴别从步骤(2)获得的酵母细胞中的外源cDNA片段的信息，基于该信息获得编码分泌型蛋白或跨膜蛋白的cDNA； 其中，所述疾病是肺癌； 其中，所述富集了5’端cDNA的cDNA片段如下制备：将经减除的肺癌细胞系H125特异性的单链cDNA的3’末端加上dC‑尾巴；然后将经减除的肺癌细胞系H125特异性cDNA与含Hind III位点的引物SEQ ID NO：1退火；接着合成第二链；然后超声降解双链cDNA并钝化；接着在3’端连接Not I酶切位点；最后通过使用以下引物仅扩增cDNA文库的5’片段：SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3；基于上述PCR程序，在每条cDNA的5’‑末端添加Hind III酶切位点，3’‑末端添加Not I酶切位点，然后将各cDNA片段用Hind III/Not I酶切后，凝胶电泳分离400‑1000bp的cDNA片段。