微小RNA

摘要

本发明提供了可用于靶序列抑制、靶序列确认和靶序列减量调节的方法和组合物。本发明提供了可用于基因沉默或RNA减量调节的多核苷酸构建体，以及包含所述多核苷酸的细胞、植物和种子。本发明还提供了使用microRNA沉默靶序列或减量调节RNA的方法。

主权项

一种减量调节植物细胞中的靶序列的方法，包括：(a)向所述植物细胞中导入包含可操纵地连接于多核苷酸的在植物细胞中有功能的启动子的核酸构建体，所述多核苷酸编码修饰的miRNA前体，其中所述修饰的miRNA前体包含植物miRNA原始转录物片段，所述片段在miRNA序列和所述miRNA的互补序列中包含修饰，其中所述植物miRNA原始转录物是植物miR159原始转录物，且其中所述修饰的miRNA前体能形成第一双链RNA或发夹结构，其中所述修饰的miRNA是被修饰为(i)与靶序列完全互补，(ii)除了GU碱基配对之外与靶序列完全互补，或者(iii)从所述miRNA的5’末端计数的头10个核苷酸与靶序列完全互补的miRNA，其中所述靶序列编码植物病毒或植物类病毒的基因沉默阻抑物，且其中所述修饰的miRNA前体由SEQ ID NO：163的核苷酸序列组成；和(b)将所述核酸构建体表达足够长的时间以产生所述修饰的miRNA，其中所述修饰的miRNA结合所述靶序列以形成第二双链RNA，所述第二双链RNA被裂解从而减量调节靶序列。