| 主权项 |
一种纳米金颗粒检测单核苷酸多态性的方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步，利用DNA折纸术构造一个非对称二维图形，制备DNA折纸芯片；第二步，制备胶体金探针；第三步，DNA短链与胶体金探针杂交；第四步，粒径胶体金探针与非对称二维图形DNA折纸芯片连接；第五步，单核苷酸多态性检测；第一步中所述的DNA折纸芯片的制备方法：(1)把所有要用的100μM订书钉链，包括形成非对称二维图形的、伸出探针的等体积混合，再稀释20倍备用；(2)在96孔板上混合总量为30μl的溶液：0.025μM订书钉链：22μl；1/2浓度的M13mp18∶1μl；1×TAE‑Mg2+buffer∶7μl；第二步中所述的胶体金探针制备方法：①寡核苷酸与5nm粒径胶体金摩尔浓度比200比1加入10mM磷酸缓冲液中，室温300rpm摇24小时；②加入终浓度0.1M NaCl，室温300rpm摇48小时；③4℃，15000rpm离心10分钟，弃上清；④加入10mM磷酸缓冲液，终浓度0.1M NaCl清洗两次；⑤加入1 x TE；10mM Tris‑HCl，1mM EDTA，pH＝8.0，4℃保存；⑥5nm粒径胶体金探针浓度利用520nm波长紫外吸收峰测定；第三步中所述的杂交是指：5nm粒径胶体金探针与10nt DNA短链摩尔浓度比1比1混合，50℃水浴杂交1小时；第四步中所述的连接是指：5nm粒径胶体金探针与非对称二维图形DNA折纸芯片摩尔浓度比2比1混合，37℃水浴杂交1小时；第五步中所述的单核苷酸多态性检测的步骤：在原子力显微镜成像前，加入报告探针摩尔浓度2倍量的靶核苷酸链，取若干时间点原子力显微镜成像。 |
