发明名称 |
一种百菌清抗原、抗体制备方法及其残留ELISA检测方法 |
摘要 |
一种百菌清抗原、抗体制备方法及其残留ELISA检测方法,是以百菌清作为起始反应物,以氨基取代4位氯原子;并采用1’1-羰基咪唑法制备其人工抗原,通过免疫新西兰大白兔获得兔抗百菌清多克隆抗体,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定其抗血清效价可达1∶5.12×104,并以此建立百菌清残留检测的ELISA方法,方法最低检测浓度0.383ng/mL。 |
申请公布号 |
CN101830980B |
申请公布日期 |
2012.06.27 |
申请号 |
CN201010154545.X |
申请日期 |
2010.04.21 |
申请人 |
大连民族学院 |
发明人 |
于基成;郭乃菲;刘秋 |
分类号 |
C07K14/765(2006.01)I;C07K14/77(2006.01)I;C07K16/44(2006.01)I;G01N33/543(2006.01)I;G01N33/52(2006.01)I |
主分类号 |
C07K14/765(2006.01)I |
代理机构 |
大连东方专利代理有限责任公司 21212 |
代理人 |
李猛 |
主权项 |
1.一种杀菌剂百菌清的人工抗原制备新方法,其特征在于包括以下步骤:(1)将百菌清充分溶解于二氯甲烷,再按百菌清和乙二胺的摩尔比为1∶0.5-1的量加入乙二胺-水混合液,20-25℃下缓慢搅拌22-24h;(2)反应结束后,分离二氯甲烷层,水洗二氯甲烷层3-5次,蒸发去除二氯甲烷后,得黄绿色晶体,为目标半抗原,所述目标半抗原结构如①所示;(3)将(2)获得的半抗原用DMF溶解,再向其中加入同样用DMF溶解的等摩尔的1’1-羰基咪唑,20-25℃下搅拌2-3h,将混合体系缓慢滴加到用碳酸盐缓冲液(CBS)溶解的牛血清蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)溶液中,搅拌4-6h;以6000r/min的速度离心20-30min弃沉淀,上清采用8000-14000MW透析膜或袋进行透析,冻干后,即得人工包被抗原,所述人工包被抗原结构如②所示;<img file="FDA0000140758220000011.GIF" wi="1762" he="651" /> |
地址 |
116600 辽宁省大连市开发区辽河西路18号 |