一种鉴定大白菜—甘蓝异附加系的方法

摘要

本发明公开了一种鉴定大白菜-甘蓝异附加系的方法。该方法包括(1)根据已发表的甘蓝遗传图谱，选用了位于甘蓝不同连锁群的91对SSR引物；(2)提取不同品种的大白菜和甘蓝的基因组DNA，PCR扩增；(3)扩增产物在6％变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离，银染检测；(4)筛选甘蓝连锁群相对于大白菜特异的SSR引物；(5)利用甘蓝连锁群相对于大白菜特异的SSR引物，鉴定大白菜-甘蓝异附加系。本发明可以在分子水平快速、准确鉴定大白菜与甘蓝的杂交种、异附加系、异代换系、易位系等重要的遗传分析材料，为利用甘蓝基因改良大白菜遗传背景奠定基础。

主权项

一种鉴定大白菜‑甘蓝异附加系的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)根据甘蓝遗传图谱，选用位于甘蓝不同连锁群的91对SSR引物；(2)CTAB法提取不同品种的大白菜和甘蓝的基因组DNA，PCR扩增；(3)扩增产物在6％变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离，银染检测；(4)筛选甘蓝连锁群相对于大白菜特异的SSR引物；(5)利用筛选到甘蓝连锁群相对于大白菜的特异SSR引物，鉴定大白菜‑甘蓝异附加系；其中步骤(1)所述91对SSR引物为01连锁群的Na10H03：正向引物GAGCTGGCTCATTCAACTCC反向引物CACAATTTCTCAGACAAAACGG，Na10H06：正向引物AGAATGAGACCCAGAAACCG反向引物GCCACACTCTCTCTTACTAGGGC，Na12C08：正向引物GCAAACGATTTGTTTACCCG反向引物CGTGTAGGGTGATCTAGATGGG，Na12H04：正向引物TTTATCGTCTTTCCCCTCCC反向引物ACAAGGAACTAGAGAGAGAGAG，nga248：正向引物TACCGAACCAAAACACAAAGG反向引物TCTGTATCTCGGTGAATTCTCC，Ni4B10：正向引物GTCCTTGAGAAACTCCACCG反向引物CCGATCCCATTTCTAATCCC，Ol10A11：正向引物CACAATTTCTCAGACAAAACGG反向引物GAGCTGGCTCATTCAACTCC，Ol10F11：正向引物TTTGGAACGTCCGTAGAAGG反向引物CAGCTGACTTCGAAAGGTCC；02连锁群的Na12C03：正向引物ATCGTTGCCATTAGGAGTGG反向引物ACCAAATTAACCCTCTTTGC，Na12H09：正向引物AGGCGTCTATCTCGAAATGC反向引物CGTTTTTCAGAATCTCGTTGC，Ni2C12：正向引物ACATTCTTGGATCTTGATTCG反向引物AAAGGTCAAGTCCTTCCTTCG，Ol09A03：正向引物CTGGTTTTCTCCTTCATCAG反向引物CTGTGTAGCTTTTAGTCTTT，Ol09A06：正向引物TGTGTGAAAGCTTGAAACAG反向引物TAGGATTTTTTTGTTCACCG，Ol13E08：正向引物TTCGCAACTCCTCCTAGAATC反向引物AAGGTCTCACCACCGGAGTC，Ol13G05：正向引物GTGTGCAGGAAACGATGTTC反向引物GGGAGTTTGAAGAGAAAGCG，sORA26：正向引物TGTTTACCTGTTGGAGAT反向引物AACCCTAAGCATCTGCGA，sORA43：正向引物GCGCGTGTGGGATCAGAA反向引物CTTCTCCACCGTCGATCG；03连锁群的BN12A：正向引物GCCGTTCTAGGGTTTGTGGGA反向引物GAGGAAGTGAGAGCGGGAAATCA，CALSSR：正向引物GTTAAGTGTGGCGTTAGAGG反向引物CCTTGGTACATGCCACTGAA，Na10E02：正向引物TCGCGCATGTAATCAAAATC反向引物TGTGACGCATCCGATCATAC，Na10G10：正向引物TGGAAACATTGGTGTTAAGGC反向引物CATAGATTCCATCTCAAATCCG，Na12F12：正向引物CGTTCTCACCTCCGATAAGC反向引物TCCGATGTAGAATCAGCAGC，Na14E02：正向引物ACTGGCTACATGAGTTTCAGTG反向引物GAGGGAAGACAACTGGTCTCA，Ni4G04：正向引物GAGGCGCGTGGACTAACC反向引物TTACACCCCATCCAAACTCC，Ol10A05：正向引物TGTAATAACCCGACCCATCC反向引物CTCTCTCGCTCTCTCGATCC，Ol10B04：正向引物ATCTTCCTCCACGTTCATGC反向引物CGAATCTTGAAGTTCTGACCC，Ol11B05：正向引物TCGCGACGTTGTTTTGTTC反向引物ACCATCTTCCTCGACCCTG，Ol11G11：正向引物GTTGCGGCGAAACAGAGAAG反向引物GAGTAGGCGATCAAACCGAG，Ol13A10：正向引物TCCGATGTAGAATCAGCAGC反向引物CGTTCTCACCTCCGATAAGC，Ol13C12：正向引物AGAGGCCAACAAAGAACACC反向引物GAAGCAGCACCAGTGACAAG，Ol13H09：正向引物AAGGAGAGGAGTGATGGACG反向引物CACATTAAACACGGCACAGG，Ra2E11：正向引物GGAGCCAGGAGAGAAGAAGG反向引物CCCAAAACTTCCAAGAAAAGC；04连锁群的Na10B04：正向引物GCGTCGAGAGAGATCGAGAG反向引物CTCACCGTCACTGCTTCATC，Na10F06：正向引物CTCTTCGGTTCGATCCTCG反向引物TTTTTAACAGGAACGGTGGC，Na12E05：正向引物CGTATGTTTGTTCCACCTGC反向引物ACTAGCAACCACAACGGACC，Na14E08：正向引物TTACTATCCCCTCTCCGCAC反向引物GCGGATTATGATGACGCAG，Na14E11：正向引物TCATCCTTCTCACACCAAAATC反向引物CCTCGAAATAGCTCCAACCC，Ni2D08：正向引物TTTAGGGAAAGCGAATCTGG反向引物ACAACAACCCATGTCTTCCG，Ni4F08：正向引物GAGAAAGAAGCAAACACAAAGC反向引物TCTCTTTCTTCTCGTTGCCG，Ol10A09：正向引物GCATGCATAACTAGAGAGAGAGAGA反向引物CCTTTCACTCAACTAAACCATACTC，Ol10F12：正向引物TCCATGTTTCATGTTGGAGG反向引物CTCTCCGGCTTCACTTTCC，Ol10G08：正向引物TGCTTAATTGATTAGGGCAG反向引物TTACCTCATCAGGTGGAGGC，Ol11H02：正向引物TCTTCAGGGTTTCCAACGAC反向引物AGGCTCCTTCATTTGATCCC，Ol11H08：正向引物ATCGAAGGCAAATCACCAAG反向引物CAGTGATTCAGAGGTATAGAG，Ol12B05：正向引物GGAAAGCGAAGAGTGACGAC反向引物ATTGGGTAAAGCTGTGCTCG，Ol12F07：正向引物TTTCCCCTTCTGGGAAAAAG反向引物TTACCCCAGCAGGTATTTGG，Ol13D02A：正向引物TTCTCCACACCAAGCAACAC反向引物TACAGGCTTGGTCGTTTTCC；05连锁群的Na10D11：正向引物GCATCATTGACCCTGAAACC反向引物AACCTCCATTTGGTAAGCCC，Na10A08：正向引物CATGGTTAAAACAATGGCCC反向引物CAAGAAACACCATCATTTCTCA，Na10B08：正向引物AGAGAAAAACACTTCCCGCC反向引物GTGAGCTTTGCGAAACACG，Na10G08：正向引物TTTCTTTTAACCTGATGTTTTGG反向引物TCACTGTGTTTACTTGCGCC，Na12D10：正向引物GCCCTCAAAAAGAGAGTTGC反向引物TTGATGTGGGTGAGGCTAGG，Na12E06A：正向引物TTGGGTTGACTACTCGGTCC反向引物CCGTTGATTTGGCTAAGACC，Ni2F02：正向引物TGCAACGAAAAAGGATCAGC反向引物TGCTAATTGAGCAATAGTGATTCC，Ni4C11：正向引物ATAAGGCCGATGTTTCCTCC反向引物CACAGTTGCTTTGGATCTCG，Ol10G09：正向引物TGCTTCCTTTTTCTTCGCTC反向引物GAAGCACGAACGCGAGAG，Ol12F02：正向引物GGCCCATTGATATGGAGATG反向引物CATTTCTCAATGATGAATAGT，Ra2A04：正向引物AAAAACTCCTCTTCAACG反向引物CCCAAAGTTAGGTTTTAATGTAATCTC，sORA21：正向引物TTCAGCACTAGCTCATGG反向引物TCCTTCTCAGGCACTCTT；06连锁群的Apla 5pr：正向引物GAGAGAATTTGATGATGAACAT反向引物CCTTTTACCTGTATCTTCTATTTAG，ca72：正向引物AATCCCAGTAACCAAACACACA反向引物CCCAGTCTAACCACGACCAC，MB4：正向引物TGTTTTGATGTTTCCTACTG反向引物GAACCTGTGGCTTTTATTAC，Na10C06：正向引物TGGATGAAAGCATCAACGAG反向引物ATCAATCAACACAAGCTGCG，Na12A02：正向引物AGCCTTGTTGCTTTTCAACG反向引物AGTGAATCGATGATCTCGCC，Na14F11：正向引物CTATGGTTCATCTTTCGCCG反向引物CATGCTCCAACCACAGTTTG，nga111：正向引物CTCCAGTTGGAAGCTAAAGGG反向引物TGTTTTTTAGGACAAATGGCG，Ni2A11：正向引物AACAAACAAGAGTCGAATACGG反向引物AATGCCCTCTAACTGAGCCC，Ol10H07：正向引物TAGAGATGTCACCCGAAGGC反向引物AGCTTCATTTCAGTCGGTGG，Ol10F09：正向引物AGAGAGCGAGATTGATTGGC反向引物AAACGACCACGAGTGATTCC，Ra2A05：正向引物GCTAGTTTACGCGGCGG反向引物AAACGACATCGGCAAAGAAG；07连锁群的BN72a：正向引物GCCCACCCACCTTCTTGTCCT反向引物CCCTTCATCCAAACTCCTCCTCGT，Na12F03：正向引物GGCGACATAGATTTGAACCG反向引物TCCACTTTCTCTCTCTTCCCC，Ol10B01：正向引物CCTCTTCAGTCGAGGTCTGG反向引物AATTTGGAAACAGAGTCGCC，Ol10H04：正向引物TCACCCCTCTATATCCACCC反向引物CAGAATCTGCCTGAACATCG，Ol11C02：正向引物GCATTGCAATCTTGTTGGTC反向引物CGTTTCCATACAGATCGTAAGAC，Ra3C04：正向引物CTAACCTCAGACGGAGACGG反向引物CTTTAAACTCCGACCAACCG；08连锁群的Ni2F11A：正向引物AAAGGGTTTCAATTTCACGC反向引物GGGAAACATACTCACCACGC，Ni4D09：正向引物AAAGGACAAAGAGGAAGGGC反向引物TTGAAATCAAATGAGAGTGACG，Ol12D05：正向引物TCCATGACCAACGACAAGGTC反向引物AAGAGGCGACTTCTATTGCG，Ol12G04：正向引物CGAACATCTTAGGCCGAATC反向引物GGTTAACCTGCGGGATATTG；09连锁群的BN83b1：正向引物GCCTTTCTTCACAACTGATAGCTAA反向引物TCAGGTGCCTCGTTGAGTTC，Ni2B01：正向引物AAGGAGATTGTTTTTGGGGC反向引物AAGACTAATAAACACACGGCG，Ol10D08：正向引物TCCGAACACTCTAAGTTAGCTCC反向引物GAGCTGTATGTCTCCCGTGC，Ol11B03：正向引物ATGAAAACCAATCCAGTGCC反向引物GATAGCAGATGGAAGAGCCG，Ol11H06：正向引物TCCGAACACTCTAAGTTAGCTCC反向引物TTCTTCACTTCACAGGCACG，Ol12A04：正向引物TGGGTAAGTAACTGTGGTGGC反向引物AGAGTTCGCATACTCTGGAGC，Ol12D09：正向引物CGAGCTGAAGTGGATATTCG反向引物ACTCGCTTTTACCGTCGTC，Ol13C03：正向引物GATCGGAGATGCGATGAGAG反向引物GCATGCACCAGTGAAAAACTC，Ra1F03：正向引物AACTCGCTTTTACCGTCGTC反向引物CAAGACGTGGAGCTGAAGTG，Ra2E01：正向引物TCTATATTAACGCGCGACGG反向引物GCACACACACACTCAAACCC，Ra2E03：正向引物AGGTAGGCCCATCTCTCTCC反向引物CCAAAACTTGCTCAAAACCC；其中步骤(4)筛选到甘蓝连锁群相对于大白菜特异的SSR引物为01连锁群的Na10H03、Ni4B10、Na12C08，02连锁群的Ol13G05、sORA43、Na12C03、Na12H09，03连锁群的Ol11G11、BN12A，04连锁群的Na12E05、Ol10F12、Ol11H08，05连锁群的Na10D11、Ra2A04，06连锁群的Apla 5pr、Na14F11，07连锁群的Ol10B01、BN72a、Na12F03、Ol10H04，08连锁群的Ol12D05、Ol12G04，09连锁群的Ol12D09、Ra1F03、Ol12A04。