一种荧光定量PCR检测方法

摘要

本发明涉及一种新型荧光定量PCR检测技术，该技术将荧光分子直接标记在一侧引物的5′端，在荧光分子与引物序列之间插入15-25碱基的人工序列，另外设计一条与人工序列的互补的探针，探针的3′标记一个淬灭分子。PCR反应开始前，带有淬灭剂的探针与荧光标记的引物结合，淬灭剂与引物末端的荧光分子接近，使荧光淬灭，没有荧光信号，当PCR反应开始后，带有荧光的引物不断被整合到PCR产物中，淬灭探针被PCR扩增产物替代，PCR产物发出荧光信号，该荧光信号强度完全与PCR产物的累积呈1∶1线性关系。该方法设计容易，可以直接移植自普通PCR，标记成本低，可用于各种基因的定量检测。

主权项

一种荧光定量PCR检测方法，该方法采用荧光标记引物及淬灭探针进行检测，荧光标记引物由5′端标记的荧光分子、15‑25碱基的人工序列和引物序列所组成，淬灭探针是3′端标记淬灭分子并与荧光标记引物中的人工序列完全互补的序列，PCR反应开始前，荧光标记引物与淬灭探针成等浓度状态，荧光分子被淬灭分子淬灭，而PCR反应开始后，带有荧光分子的荧光标记引物被整合到PCR产物中并发出荧光信号，荧光信号强度完全与PCR产物的累积呈1∶1线性关系。