伤寒、副伤寒特异性转移因子口服制剂的制备工艺

摘要

本发明公开了一种伤寒、副伤寒特异性转移因子口服制剂的制备工艺，该工艺主要包括制备免疫原，动物体内免疫，体外免疫动物淋巴细胞，制备伤寒、副伤寒特异性转移因子等步骤。本发明口服制剂具有转移细胞信息、介导细胞免疫反应、特异性地抑制和杀伤伤寒、副伤寒沙门菌的功能，并且能增强非特异性免疫功能；该口服制剂服用无过敏反应，使用安全，效果明显，患者服用不会产生抗药性；本产品采用口服给药途径，服用不受条件的限制，既方便，又不影响有效成分本身的生物学活性，是一种安全有效的制剂，具有很好的社会价值和市场应用前景。

主权项

伤寒特异性转移因子口服制剂的制备工艺，该工艺包括如下步骤：(1)制备伤寒、副伤寒沙门菌免疫原：取伤寒沙门菌H901株、O901株和副伤寒沙门菌株三种菌株的脑心浸液固体培养基20小时培养物，H901株20小时培养物用0.4％甲醛生理盐水溶解后，菌液置4℃冰箱杀菌3‑5天，O901株和副伤寒沙门菌株20小时培养物分别用0.5％石炭酸生理盐水溶解后，菌液置于37℃孵箱过夜杀菌；500r/m离心洗涤菌液2次，根据计算公式：细菌数＝OD500/1.25×2×109，杀灭后的H901菌株、O901菌株、副伤寒沙门菌株分别用无菌生理盐水配制成5亿个菌/ml后，按照1∶1∶1的比例混合三种菌液，无菌实验检测为阴性后分装10ml/瓶，得免疫原，置于4℃冰箱保存；(2)动物体内免疫：免疫过程为第1、3、5、7天背部皮下多点注射0.5ml伤寒、副伤寒沙门菌免疫原；第14和21天背部皮下多点注射1.0ml伤寒、副伤寒沙门菌免疫原；第28天静脉注射1.0ml伤寒、副伤寒沙门菌免疫原；免疫结束7天后检测伤寒、副伤寒抗体效价均达到1/2000，表示免疫成功；(3)体外免疫动物淋巴细胞：无菌分离出动物脾脏淋巴细胞，用10％小牛血清RPMI 1640液制成5×107个/ml的淋巴细胞悬液，淋巴细胞悬液、浓度为50μg/ml的PHA溶液和5×106个/ml伤寒、副伤寒免疫原按5∶1∶1的比例加入培养瓶内，置5％CO2、37℃、饱和湿度的细胞培养箱内培养6天，待用；(4)制备伤寒特异性转移因子：取体内免疫成功动物的脾脏、淋巴结加入4倍量的三蒸水绞碎匀浆后，超声破碎细胞，采用冻结温度为‑25～‑50℃、融化温度为20～30℃的冻融条件冻融6次，最后将匀浆透析；(5)体外免疫动物淋巴细胞后，收集淋巴细胞超声破碎细胞，采用冻结温度为‑25～‑50℃、融化温度为20～30℃的冻融条件冻融6次，然后置低温离心机以500r/min离心20min，取上清液透析；(6)收集步骤(4)和(5)中所得透析液过滤除菌，以Lorry酚法测定特异性转移因子的多肽含量，以多肽含量为1mg/ml为标准进行相应的稀释或浓缩以多肽含量lmg/ml作为1单位，按生物制品规程分装，每支2ml含有2单位。