动物皮毛中9种芽孢杆菌16s rDNA PCR-RFLP指纹图谱分析方法

摘要

本发明为动物皮毛中9种芽孢杆菌PCR-RFLP的检测技术，具体地说是用17种内切酶对存在于动物皮毛中的9种芽孢杆菌的16s rDNA进行酶切，每种菌形成一个16s rDNA的内切酶指纹图谱，从而建立9种菌的检测方法。方法包括PCR扩增16s rDNA，然后以17种内切酶分别对9种菌的16s rDNA扩增产物进行酶切，再经琼脂糖凝胶电泳。9种芽孢杆菌分别是：球型芽孢杆菌、环形芽孢杆菌、桥石芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、耐热芽孢杆菌、侧芽短芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、炭疽芽孢杆菌。具体检测方法包括9种芽孢杆菌DNA的提取、PCR扩增16s rDNA、内切酶酶切、琼脂糖凝胶电泳、PCR-RFLP指纹图谱的建立。其优点是快速、特异性强、灵敏度高、操作简便。

主权项

芽孢杆菌鉴定的快速检测方法，其特征在于所使用的内切酶种类及酶切后形成的指纹图谱：共用17种内切酶分别对动物皮毛中的9种芽孢杆菌进行酶切鉴定，17种内切酶为：Ava I，BamH I，BgII，Dra I，EcoR I，EcoRII，HindIII，Hinf，Hpa I，Pst I，Sma I，Taq I，Xba I，Xma I，AluI，Xho I，Pvu I，并按照这样的顺序进行酶切。指纹图谱为这17种内切酶切割后形成17道的电泳图谱，而且每种菌均具有特异而且唯一的指纹。