| 主权项 |
一种红皮云杉体细胞胚诱导植株再生的方法，其特征在于红皮云杉体细胞胚诱导植株再生的方法按以下步骤实现：一、取经过预处理的红皮云杉合子胚接种于额外添加6-苄基氨基嘌呤、激动素、萘乙酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、蔗糖和胶立得的改良RJW培养基中，在温度为21±1℃的环境中进行暗培养至出现胚性愈伤组织；二、将胚性愈伤组织转培养接种于额外添加脱落酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、蔗糖和胶立得的改良RJW培养基中，在温度为21±1℃的环境中进行暗培养至体细胞胚成熟，待体细胞胚子叶发育完全后，将培养瓶开盖，在超净工作台内选弱风档，用弱风吹5～7天进行干燥处理；三、干燥处理后的成熟体细胞胚转接到额外添加激动素、萘乙酸、胶立得和蔗糖的改良RJW培养基中培养，在温度为24±1℃、光周期是明16h/暗8h的环境中培养至体细胞胚萌发；四、将萌发的体细胞胚转接到额外添加活性炭的1/2改良RJW培养基中，在温度为24±1℃、明16h/暗8h交替的环境中培养至根和茎的形成，即得到红皮云杉再生植株；步骤一改良RJW培养基中6-苄基氨基嘌呤的浓度为0.0～1.0mg/L、激动素的浓度为0.0～1.0mg/L、萘乙酸的浓度为0.0～5.0mg/L、谷氨酰胺的浓度为450mg/L、水解酪蛋白的浓度为750mg/L、蔗糖的浓度为20g/L、胶立得的浓度为2g/L；步骤二改良RJW培养基中脱落酸的浓度为0.0～9.5mg/L、谷氨酰胺的浓度为450mg/L、水解酪蛋白的浓度为500mg/L、蔗糖的浓度为60g/L、胶立得的浓度为2g/L；步骤三改良RJW培养基中激动素的浓度为0.02mg/L、萘乙酸的浓度为0.05mg/L、胶立得的浓度为2g/L、蔗糖的浓度为25g/L；步骤四1/2改良RJW培养基中活性炭的浓度为3g/L；步骤一中预处理的红皮云杉合子胚是将选择未成熟的红皮云杉种子剥去外种皮，用质量浓度为75％酒精消毒30s，再将酒精消毒过的种子转入质量浓度为1％的次氯酸钠溶液中消毒10min，之后再用无菌水冲洗5次；步骤一和步骤二中所述改良RJW培养基中药品的浓度是150.0mg/L的NH4NO3、709.9mg/L的KNO3、120.0mg/L的KH2PO4、236.2mg/L的Ca(NO3)2·4H2O、246.5mg/L的MgSO4·7H2O、256.5mg/L的Mg(NO3)2·6H2O、101.7mg/L的MgCl2·6H2O、4.15mg/L的KI、15.5mg/L的H3BO3、10.5mg/L的MnSO4·2H2O、14.68mg/L的ZnSO4·7H2O、0.125mg/L的Na2MoO4·2HO、0.125mg/L的CuSO4·5H2O、 0.125mg/L的CoCl·6H2O、13.9mg/L的FeSO4·7H2O、18.65mg/L的Na2EDTA、10000mg/L的Inositol、2.0mg/L的Vitamin B1、0.5mg/L的Vitamin B6、2.0mg/L的Nicotinic acid和2.0mg/L的Glycine，改良RJW培养基的pH值为5.8。 |
