柿单宁凝胶固定啤酒酵母菌的制备方法

摘要

一种柿单宁凝胶固定啤酒酵母菌的制备方法，由提取柿单宁、配制溶液、制备啤酒酵母菌菌悬液、制备柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌、柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌保存步骤组成。采用本发明制备的柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌，用扫描电镜观测其表面微观结构，柿单宁凝胶呈不规则的表面形态，凝胶内部具有较疏松的多孔网状结构，为固定化细胞的栖息和繁殖提供了良好的微环境，便于营养物质和代谢物质的传递，适合微生物的生长，有利于啤酒酵母菌的繁殖。柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌与游离酵母菌菌悬液、海藻酸钠-钙固定的酵母菌包埋剂的发酵效果对比实验表明，在同一条件，柿单宁溶液和明胶溶液形成凝胶，固定的啤酒酵母菌的真实发酵度高，达86.51％。

主权项

1、一种柿单宁凝胶固定啤酒酵母菌的制备方法，其特征在于他是由下述步骤组成：(1)提取柿单宁取打浆机粉碎的青柿果，按青柿果与提取剂、盐酸的质量比为1∶4∶0.05加入提取器的烧瓶中，在90℃回流提取20分钟，再重复提取2次，合并3次提取液，室温静置1小时，抽滤，除去残渣，滤液用旋转薄膜蒸发仪于45～50℃减压浓缩至相对密度为1.2～1.3g/cm3、蒸发，除去提取剂，得粗提取物，将活化好的AB-8大孔吸附树脂装入3.5cm×80cm色谱柱中，粗提取物加蒸馏水稀释至10mg/mL，以2mL/分钟上柱，充分吸附，用蒸馏水淋洗至洗出液用苯酚-硫酸法检测不出糖为止，再用3倍柱床体积的提取剂以2mL/分钟洗脱，将洗脱液用旋转薄膜蒸发仪于45～50℃蒸发，除去提取剂和部分水，再用真空冷冻干燥机真空干燥，冷阱温度为-50℃，绝对真空度为50～100Pa，得到柿单宁粗品；上述的提取剂是质量浓度为50％的甲醇水溶液、质量浓度为50％的丙酮水溶液、质量浓度50％乙醇水溶液、蒸馏水中的任意一种，盐酸为分析纯；(2)配制溶液用无菌蒸馏水将柿单宁粗品配制成质量浓度为3％～6％的单宁水溶液，用蒸馏水配制质量浓度为2.5％～4％的明胶水溶液和质量浓度为1％～3％的聚乙烯醇水溶液；(3)制备啤酒酵母菌菌悬液将啤酒酵母菌在25mL麦芽汁液体培养基中30℃活化24小时，再在250mL麦芽汁培养基中30℃扩大培养3天，制备成啤酒酵母菌增殖培养液，装入无菌离心管中，3000转/分钟离心10分钟，倾去上清液，得到菌体，用无菌蒸馏水洗涤菌体，在相同条件再离心菌体，得湿菌体，加入无菌蒸馏水，制成菌液浓度为2.8×1010个/mL的啤酒酵母菌菌悬液，备用；上述的麦芽汁培养基是可溶性固形物浓度为10％的麦芽汁培养基；(4)制备柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌将质量浓度为2.5％～4％的明胶水溶液和交联剂在110℃灭菌15分钟，冷却至25～45℃，将质量浓度为2.5％～4％的明胶水溶液和交联剂混合，搅拌均匀，加入菌液浓度为2.8×1010个/mL的啤酒酵母菌菌悬液，混合均匀，25～45℃水浴中保温，搅拌过程中缓慢加入质量浓度为3％～6％的单宁水溶液，质量浓度为2.5％～4％的明胶水溶液与交联剂、菌液浓度为2.8×1010个/mL的啤酒酵母菌菌悬液、质量浓度为3％～6％的单宁水溶液的体积比为1∶0.025∶0.25∶1，单宁与明胶发生凝胶化作用，形成包埋剂，包埋啤酒酵母菌，包埋完毕后，室温静置12小时，过80目筛，分离聚沉物，制备成柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌；上述交联剂是质量浓度为1％～3％的聚乙烯醇水溶液或质量浓度为1％的CaCl2水溶液；(5)柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌保存将柿单宁凝胶固定的啤酒酵母菌保存在0～4℃冰箱内。