一种二甲氧基磷酸酯类农药通用半抗原的合成方法

摘要

一种二甲氧基磷酸酯类农药通用半抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明的合成过程分酯化、酰化、水解三个步骤，首先将对羟基苯丙酸与甲醇发生酯化反应，使羧基甲酯化；然后所得的对羟基苯丙酸甲酯再与二甲氧基磷酰氯反应，得到二甲氧基磷酸酯；最后是将第一步酯化形成的甲酯再水解，将羧基还原出来得O，O-二甲基-O-(4-丙酸基苯基)磷酸酯；此磷酸酯与卵清蛋白偶联，作为二甲氧基磷酸酯类农药多残留ELISA分析的包被抗原。该物质与蛋白偶联之后作为此类农药酶联免疫检测过程中的包被抗原，因为此结构中含有苯环，利用包被抗原与免疫原结构上的差异来进一步提高检测灵敏度，降低检测限。

主权项

1、一种二甲氧基磷酸酯类农药通用半抗原的合成方法，其特征是合成过程分酯化、酰化、水解三个步骤，首先将对羟基苯丙酸与甲醇发生酯化反应，使羧基甲酯化；然后所得的对羟基苯丙酸甲酯再与二甲氧基磷酰氯反应，得到二甲氧基磷酸酯；最后是将第一步酯化形成的甲酯再水解，将羧基还原出来得O，O-二甲基-O-(4-丙酸基苯基)磷酸酯；合成步骤为：(1)酯化在50mL烧瓶中加入对羟基苯丙酸3.5g和甲醇14mL，对羟基苯丙酸与甲醇的质量/体积比为1∶4，加1mL浓硫酸，120℃加热回流2h，之后先蒸出5mL的甲醇，加入碳酸钠饱和溶液直到无气体产生；然后用二氯甲烷萃取，萃取液经35℃旋转蒸发除去溶剂，再真空干燥得红棕色油状物对羟基苯丙酸甲酯，纯度达99％以上；(2)酰化在50mL的圆底烧瓶中加入10～15mL乙腈作溶剂，加入第一步产物对羟基苯丙酸甲酯和二甲氧基磷酰氯，两者为等摩尔配比，对羟基苯丙酸甲酯10mmol、二甲氧基磷酰氯10mmol、2.5g碳酸钾，常温下磁力搅拌2h，反应过程中不断用薄层层析监测反应进度，直到酰氯完全反应；然后静置一段时间，上层液体再经0.5μm的滤膜过滤得澄清液体，旋转蒸发将溶剂除去后得黄色油状物，再经硅胶柱色谱分离得到目标产物二甲氧基磷酸酯，纯度大于90％；(3)水解在20mL的乙醇溶液中加入1mmol纯化后的第二步产物二甲氧基磷酸酯，然后加入7mL 1M的氢氧化钾，室温下搅拌45min，然后用1M的盐酸酸化，再用乙酸乙酯来萃取，萃取液经旋转蒸发除去溶剂得浅黄色油状物，再经硅胶柱色谱分离，得到最终目标产物O，O-二甲基-O-(4-丙酸基苯基)磷酸酯，纯度大于97％。