芳基－N－甲基氨基甲酸酯类农药残留免疫检测方法

摘要

本发明涉及芳基－N－甲基氨基甲酸酯类农药残留免疫的检测方法，属于生物技术领域。以载体蛋白与芳基－N－甲基氨基甲酸酯类农药通用半抗原(HA)偶联，获得完全抗原，以该抗原免疫Balb/C小鼠，应用杂交瘤技术，经ELISA法筛选及有限稀释法亚克隆化，获得可稳定分泌抗芳基－N－甲基氨基甲酸酯类农药的杂交瘤细胞株，制备获得单克隆抗体。以单克隆抗体为基础，建立四种芳基－N－甲基氨基甲酸酯类农药残留ELISA检测方法，该方法具较强的特异性、灵敏性及稳定性，为芳基－N－甲基氨基甲酸酯类农药微量检测提供了快速、灵敏、特异的技术方法。

主权项

1、抗芳基-N-甲基氨基甲酸酯类农药单克隆抗体的制备方法(1)芳基-N-甲基氨基甲酸酯类农药人工抗原的合成：将免疫半抗原6-(苯氧基羰基)氨基-1-己酸，简称HA，与牛血清白蛋白BSA偶联，获得通用免疫原HA-BSA；将包被半抗原β-(间-甲基苯氧基羰基)氨基丙酸，简称HB，与卵清蛋白OVA偶联，获得包被抗原HB-OVA；(2)小鼠免疫和杂交瘤细胞株的建立：用HA-BSA免疫Balb/C小鼠，腹腔注射；应用杂交瘤技术，取出抗血清效价为1.28×106的小鼠脾细胞，将其与骨髓瘤细胞Sp2/0融合，以HB-OVA为包被抗原，通过间接ELISA和间接竞争ELISA法筛选、有限稀释法亚克隆化，获得目的杂交瘤细胞株；(3)获得单克隆抗体：体外培养杂交瘤细胞株获得细胞上清液和小鼠体内制备腹水，纯化后获得特异性抗芳基-N-甲基氨基甲酸酯类农药的单克隆抗体。