人胰高血糖素相关肽－2类似物

摘要

本发明是人胰高血糖素相关肽-2类似物Pro-Pro-h[Gly²]GLP-2(1-35)。采用本室构建的新的长度30-70aa的活性多肽的融合表达制备技术平台，构建在大肠杆菌细胞内高效融合表达Pro-Pro-h[Gly²]GLP-2(1-35)的基因工程菌，融合蛋白表达量占细菌总蛋白的40％以上。在Pro-Pro-h[Gly²]GLP-2的N端设计一个酸敏感位点(Asp-Pro)，用酸切割融合蛋白可获得Pro-Pro-h[Gly²]GLP-2(1-35)，Pro-Pro-h[Gly²]GLP-2(1-35)在体内被二肽酶IV及PPCE酶切割生成高活性的h[Gly²]GLP-2(1-33)。重组菌经裂解→洗涤→尿素溶解→乙醇分级沉淀分离融合蛋白，60mmol/L盐酸水解融合蛋白，DEAE-52柱层析分离→HPLC分离获得Pro-Pro-h[Gly²]GLP-2(1-35)，用电喷雾质谱法测得其相对分子质量为3948Da。Pro-Pro-h[Gly²]GLP-2冻干后溶于PBS缓冲液中，对正常雄性SD大鼠(160g-200g)皮下给药14天，0.1，0.25，0.5mg/kg/day，与对照组相比，小肠重量显著增加，小肠绒毛增高。有可能用于改善短肠综合症，吸收障碍和吸收功能改变的胃肠疾病，放、化疗病人的营养吸收状况，具有很好的临床应用前景。

主权项

1. 一种人胰高血糖素相关肽-2类似物Pro-Pro-h[Gly2]GLP-2(1-35)即Pro-Pro-h[Gly.sup.2]GLP-2(1-35)，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，为Pro Pro His GlyAsp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr Ile Leu Asp Asn Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile AsnTrp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr Asp，其特征在于：其由35个氨基酸构成，在N端有2个脯氨酸残基，N端有二肽酶IV及PPCE酶切位点。