海龙抗肿瘤活性蛋白

摘要

一种医药技术领域的海龙抗肿瘤活性蛋白，以粗吻海龙为原料提取的分子量为55kDa的活性蛋白，其中，蛋白质含量在99-100％之间，糖含量在0-1％之间，其外观为白色粉末，SDS-PAGE显示是单一条带。本发明所提供的海龙抗肿瘤活性蛋白，具有抗肿瘤活性，同时有低毒、增强免疫的特点。本发明单独或与其它药物联合使用均有抗肿瘤作用，主要用于各种癌症的治疗和辅助治疗，如：肺癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、白血病等，尤其对A-549、Bel-7402、Hela、Lovo、P-388细胞株有较强杀伤作用；同时还具有增强免疫的作用。

主权项

1、一种海龙抗肿瘤活性蛋白，其特征在于，以粗吻海龙为原料提取的分子量为55kDa的活性蛋白，其中，蛋白质含量在99-100％之间，糖含量在0-1％之间，通过以下方式获得：(1)以粗吻海龙为原料，粉碎后过筛，待用；(2)在粗吻海龙粗粉中加入4～12倍量的体积百分比为0～90％的乙醇-水溶液，匀浆、低温浸泡，离心后取上清液，即为海龙蛋白粗提液；(3)将蛋白粗提液于20～60℃减压蒸发浓缩后，与HZ-801大孔树脂接触，充分吸附后用蒸馏水洗脱，收集蛋白组分，得到海龙蛋白分离液；(4)将海龙蛋白分离液减压蒸发浓缩，加入硫酸铵粉末使硫酸铵浓度达到20％-90％饱和度，充分搅拌后4℃静置，离心，收集沉淀，将沉淀用少量Tris-HCl缓冲液溶解后透析、浓缩、冷冻干燥，即得到海龙粗蛋白；(5)将海龙粗蛋白用pH7.2、20mM Tris-HCl缓冲液溶解后，与凝胶过滤介质接触，用pH7.2、20mM Tris-HCl缓冲液洗脱，收集分子量在10-100kDa的蛋白质洗脱液，透析、浓缩、冷冻干燥后，经体外抗肿瘤活性检测，获得海龙抗肿瘤粗蛋白；(6)将海龙抗肿瘤粗蛋白用pH8.4、20mM Tris-HCl缓冲液溶解，与离子交换介质接触，梯度NaCl缓冲液洗脱，得到数个不同浓度NaCl缓冲液的洗脱组分，0.5M NaCl洗脱峰经透析、浓缩、冻干后即为所述的海龙抗肿瘤活性蛋白。