肿瘤疫苗的制备方法

摘要

一种肿瘤疫苗的制备方法，其先采用常规方法制成单个瘤细胞悬液，将它用β-榄香烯(或莪术油)和MMC处理，然后加入醛类固定剂并与CP混成I型瘤苗。或将单个瘤细胞悬液用病毒处理，其可以是紫外线灭能的痘苗病毒也可以是新城鸡瘟病毒，它们再分别与β-榄香烯(或莪术油)或β-榄香烯(或莪术油)+MMC混合，再加入醛类固定剂并与CP混合分别得到II型和III型瘤苗。本发明的方法制备的肿瘤疫苗灭能彻底、保存方便、疗效高。

主权项

1、一种肿瘤疫苗的制备方法，其先要制备单个瘤细胞悬液，即将肿瘤组织制成1mm3的小块，洗涤后依次用胰酶(0.14%)、DNA酶(0.03%)消化，置4℃8～16小时，再经摇床震荡30分钟，然后用200目不锈钢网过滤，滤液被离心洗涤之后用氯化铵缓冲液处理，可得到单个瘤细胞悬液，其特征在于：细胞水平瘤苗的制备如下：Ⅰ型瘤苗：将上述单个瘤细胞悬液与等体积的200～400μg/ml的莪术油或100～200μg/ml的β-榄香烯及终浓度为50～100μg/ml的MMC处理60～120分钟，离心洗涤后加入醛类固定剂，再与短小棒状杆菌(CP)混合成为混合瘤苗，或Ⅱ型瘤苗：向上述单个瘤细胞悬液加入新城鸡瘟病毒(NDV)按100--1000血凝单位(HU)/3×106～7瘤细胞或者用紫外线灭能的痘苗病毒(UV--VV)按感染倍数(Moi)为10的比例处理，于37℃5%CO2下温育4小时，离心洗涤后再分别与等体积的200～400μg/ml莪术油或100～200μg/mlβ-榄香烯混合，再于37℃温育30～60分钟，离心后向细胞沉淀加入醛类固定剂并与CP混合，或Ⅲ型瘤苗：向上述单个瘤细胞悬液加入新城鸡瘟病毒(NDV)按100～1000血凝单位(HU)/3×106～7瘤细胞或者用紫外线灭能的痘苗病毒(UV--VV)按感染倍数(Moi)为10的比例处理，于37℃、5%CO2下温育4小时，离心洗涤后再分别与等体积的200～400μg/ml莪术油+MMC或100～200μg/mlβ-榄香烯+MMC混合，再于37温育30～60分钟，离心后向细胞沉淀加入醛类固定剂并与CP混合。