一种简便快速检测L‑半胱氨酸的方法

摘要

本发明公开了一种快速简单检测L‑半胱氨酸的紫外比色方法。该方法基于L‑半胱氨酸与1‑氯‑2,4‑二硝基苯在沸水浴中快速生成黄色络合物，并且十六烷基三甲基溴化铵可加速该反应的速率。本反应肉眼可检测到20μM的L‑半胱氨酸。在紫外检测仪下的检出限为0.5μM。本发明的优点：操作简单方便、耗时短、快速特异、肉眼可视、灵敏经济等。

主权项

一种简便快速检测L‑半胱氨酸的方法，其特征在于：利用L‑半胱氨酸与1‑氯‑2,4‑二硝基苯在沸水浴条件下发生亲核取代反应，从而快速灵敏的定量检测待测溶液中L‑半胱氨酸；待测溶液中加入1‑氯‑2,4‑二硝基苯，并在十六烷基三甲基溴化铵及沸水浴条件下催化亲核取代反应生成黄色络合物，从而利用紫外可见分光光度计对黄色的络合产物在355nm处测定紫外吸收值，通过标准曲线对待测物中L‑半胱氨酸进行定量检测；所述标准曲线的绘制，1)L‑半胱氨酸母液的配制：将L‑半胱氨酸在棕色容量瓶中用去离子水定容，配置母液；2)L‑半胱氨酸浓度梯度稀释：将母液分别稀释至不同梯度浓度；3)构建缓冲条件：将不同梯度浓度的母液中分别加入A液、B液与C液，再用去离子水定容充分混匀后于沸水浴中反应2‑15min；4)紫外可见分光光度计测定：将步骤3)所得液体用紫外可见分光光度计测定波长为355nm的数值，而后绘制标准曲线；所述A液的配方为：浓度为0.05‑0.5M的PBS缓冲液，pH 5‑7；B液为：浓度为0.01‑0.3M的十六烷基三甲基溴化铵的水溶液；C液为：50‑100mM的1‑氯‑2,4‑二硝基苯的乙醇溶液。