一种花生离体定向筛选和鉴定抗乙草胺体的方法

摘要

本发明提供了一种花生离体定向筛选和鉴定抗乙草胺体的方法，主要步骤是将诱变后培养获得的花生外植体在添加了乙草胺的培养基上，进行抗乙草胺体的定向筛选。4周后将存活的外植体转移到恢复生长培养基上培养。经筛选获得的再生植株，取其叶片置于乙草胺溶液中，进行抗乙草胺的鉴定。本发明利用离体培养定向筛选和鉴定抗乙草胺体，操作方便，不受季节限制，可节省大量的人力、物力、财力。

主权项

一种花生离体定向筛选和鉴定抗乙草胺体的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将发生突变或遗传转化形成体胚/不定芽的外植体转移至体胚萌发/植株再生及筛选培养基上培养，进行抗乙草胺体的定向筛选；所述体胚萌发/植株再生及筛选培养基以MS培养基为基本培养基，并添加4mg/L乙草胺和4～6mg/L BAP；(2)在体胚萌发/植株再生及筛选培养基上培养4周后，将存活的外植体转移到恢复生长培养基上培养，得到抗乙草胺苗；所述恢复生长培养基以MS培养基为基本培养基，并添加4～6mg/L BAP；(3)在恢复培养基上获得的抗乙草胺苗叶片完全展开后，取下叶片，放于乙草胺溶液中，进行抗乙草胺的鉴定；(4)经鉴定抗乙草胺的小苗,生长至1.5～2.5cm时，以抗乙草胺苗为接穗，无菌萌发的花生实生苗为砧木，进行无菌嫁接；(5)无菌嫁接苗转回到盛有沙子的培养瓶中，在培养室培养2～3天，使伤口愈合；(6)搭建临时塑料弓棚，宽度1.8～2.7米，高度1.2～1.5米,浇足水，保持空气湿度；(7)抗乙草胺的嫁接瓶苗直接移栽塑料弓棚的土壤中，移栽的株距为40～45cm，株距为16～20cm，嫁接口在土壤表面以上，移栽后随即浇水，保证根系需水；(8)嫁接苗移栽最初的2个周上午九点至下午4点搭遮荫网，防止太阳直晒；(9)移栽2周后，撤去遮荫网，并通风；(10)移栽3周后，撤去塑料弓棚。