一种基于高通量测序的多样本的一个或多个靶序列的检测方法和试剂盒

摘要

本发明提供基于高通量测序的捕获和标记多样本的一个或多个靶序列的方法或试剂盒。本发明整合了多重扩增技术、连接技术和PCR‑index技术，提供了一种新型标记技术方案，使用特异性捕获引物扩增靶序列，利用连接反应在PCR产物的两端各引入一个带U碱基且序列已知的接头，用USER酶切开U碱基，根据接头已知序列设计PCR引物，并利用PCR反应在PCR产物两端分别引入标签引物，通过PCR产物两端引入的标签引物序列特异地得到PCR产物的样本信息，再根据每个靶序列的捕获引物序列将测序结果对应到样本的每个靶序列上。

主权项

一种基于高通量测序的捕获和标记多个样本的一个或多个靶序列的方法，包括以下步骤：第一轮扩增：使用根据靶序列设计的捕获引物，在适于多重扩增目的核酸的条件下分别对各样本的目标区域进行扩增，回收所设计的目标区域范围之内的所有DNA条带；第二轮扩增：使用第一轮扩增得到的产物作为模板进行第二轮扩增以使第二轮扩增产物上带有可对各样本进行区分的标签；混合与回收：将各样本的富集扩增产物均一地混合在一起，回收所设计的目标区域范围之内的所有DNA条带；测序：将回收的DNA混合物进行测序；分析：基于每个样本的扩增产物中独特的标签，将获得的测序结果首先与样本一一对应；根据每个靶序列的捕获引物序列，再将测序结果对应到样本的每个靶序列上。