一种草菇电击法遗传转化方法

摘要

本发明涉及一种草菇电击法遗传转化方法，包括：测定草菇菌丝对潮霉素的最低耐受浓度，在PDA培养基培养草菇菌丝，利用溶壁酶降解草菇菌丝细胞的细胞壁，收集草菇菌丝体；将构建完成的外源重组载体质粒与草菇菌丝体置于电击杯中，不同的外加电场的作用下完成电击过程，电击后的草菇菌丝体涂布于再生培养基中，在含有潮霉素的培养基上进行抗性筛选，分子检测正常生长的单克隆是否为阳性克隆。本发明为草菇分子生物学的研究提供新的方法，同时为建立草菇生物反应器开辟了方便而经济的途径，为有效解决草菇生产和储藏中的难题提供技术支持和保障。

主权项

一种草菇电击法遗传转化方法，包括：(1)测定草菇菌丝对潮霉素的最低耐受浓度；(2)将草菇菌种接种于液体PDA培养基中，32℃静置培养3～5天，得到草菇菌丝；将草菇菌丝过滤，溶壁酶酶液酶解，离心，加入电击缓冲液制成菌丝液；(3)向电击杯中加入电击缓冲液和菌丝液，再加入外源重组载体质粒吹打混匀，放入冰中静置；用高压脉冲电击转化仪电击，电压为800V，冰上静置；随后恢复培养，加入液体再生PDA培养基，摇床培养1～2h；(4)取经过步骤(3)转化处理后的菌丝液涂布于无潮霉素的再生PDA平板上，32℃培养，切取新生长的菌丝，转入含有最低耐受浓度潮霉素的再生PDA平板上，进行筛选；选取能够继续生长的菌块，转入含有最低耐受浓度潮霉素的液体PDA培养基中，于32℃培养，得到转化子；提取转化子基因组DNA基因组，进行PCR分子检测，成功扩增出外源基因则为阳性转化子。