一种砷还原微生物的驯化培养方法

摘要

本发明公开了一种砷还原微生物的驯化培养方法。配制好培养基高压蒸汽灭菌，生理盐水瓶经过无菌水清洗后放入超净工作台紫外灭菌；用注射器向生理盐水瓶中注入灭菌后的培养基，并接种10%的厌氧活性污泥；向瓶中充入氢气再抽空，反复操作4~6次，最后充满氢气，放入恒温振荡器中培养，每天向瓶中补足氢气；培养几天后，从瓶中抽取10%的混合液注入新的生理盐水瓶中，并加入20μg As(Ⅴ)/L；连续培养，当As(Ⅴ)基本被去除后，将混合液中As(Ⅴ)的浓度增加到50μg As(Ⅴ)/L，重复补充As(Ⅴ)、碳源和氮源，直至瓶中产生大量微生物絮体并且As(Ⅴ)的去除率达到稳定，即完成砷还原微生物的驯化培养。

主权项

一种砷还原微生物的驯化培养方法，其特征在于具体步骤为：(1)将配制好的培养基溶液放入高压蒸汽灭菌锅内121℃灭菌20~30min，然后取出再放入超净工作台冷却至室温备用；(2)用注射器将生理盐水瓶中的生理盐水抽尽，然后注入无菌水清洗再抽出，重复清洗4~6次，最后放入超净工作台中紫外灭菌20~30min；(3)从生活污水处理厂中取回厌氧污泥，倒入烧杯中静置，形成固液临界面；(4)用注射器向步骤(2)处理后的生理盐水瓶中注入步骤(1)处理后的培养基溶液，并从步骤(3)静置烧杯中的固液临界面处吸取接种污泥也注入步骤(2)处理后的生理盐水瓶，接种量为10%，然后用注射器抽尽生理盐水瓶中上空空气，将生理盐水瓶倒立从底部充入氢气，再抽空，反复操作4~6次，以排尽生理盐水瓶中的空气和混合液中的溶解氧，最后充满氢气，放入恒温振荡器中连续培养，设置条件为：150r/min、30℃；每天向生理盐水瓶中补足消耗掉的氢气，连续培养2~4天，制得混合液；(5)按照步骤(2)处理生理盐水瓶，备用；(6)从步骤(4)的生理盐水瓶中抽取10%制得的混合液注入步骤(5)处理后的生理盐水瓶中，并向生理盐水瓶中加入浓度为20μgAs(V)/L的Na₂HASO₄·7H₂O，然后用注射器抽尽生理盐水瓶中上空空气，将生理盐水瓶倒立从底部充入氢气，再抽空，反复操作4~6次，以排尽生理盐水瓶中的空气和混合液中的溶解氧，最后充满氢气，放入恒温振荡器中连续培养，设置条件为：150r/min、30℃；每天从生理盐水瓶中抽取10mL混合液经0.22μm滤膜过滤后测定出混合液中As(Ⅴ)的含量；(7)当As(Ⅴ)被去除后，重复步骤(6)并将混合液中As(Ⅴ)的浓度增加到50μg As(Ⅴ)/L，每天监测As(Ⅴ)的去除，当As(Ⅴ)被去除后，重复补充As(Ⅴ)、碳源和氮源，直至生理盐水瓶中产生大量微生物絮体并且As(Ⅴ)的去除率达到稳定，即完成砷还原微生物的驯化培养；所述培养基溶液的成分为：128mg/L KH₂PO₄、434mg/L Na₂HPO₄、80mg/L NaHCO₃、10mg/L NaNO₃、1mg/L CaCl₂·2H₂O、1mg/L FeSO₄·7H₂O、0.013mg/L ZnSO₄·7H₂O、0.004mg/L MnCl₂·4H₂O、0.038mg/L H₃BO₃、0.025mg/L CoCl₂·6H₂O、0.001mg/L CuCl₂·2H₂O、0.001mg/L NiCl₂·6H₂O、0.004mg/L Na₂MoO₄·2H₂O和0.004mg/L Na₂SeO₃，并以KH₂PO₄和Na₂HPO₄的混合溶液为缓冲液调节其pH=7.2；所述生理盐水瓶为药店销售的常规医用塑料注射瓶；所有步骤中使用的注射器都是无菌注射器；所充氢气是纯度为99.999%的高纯氢气。