发明名称 |
D-丙氨酸缺陷型筛选表达纤维二糖-2-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法 |
摘要 |
基于D-丙氨酸缺陷型筛选标记的表达纤维二糖-2-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法和应用,属于酶的基因工程技术领域。本发明以枯草芽孢杆菌1A751为出发菌株,敲除其染色体上D-丙氨酸消旋酶基因(<i>dal</i>)得到D-丙氨酸缺陷型的枯草芽孢杆菌1A751(<i>dal</i><i><sup>-</sup></i>);将来源于一种嗜热厌氧杆菌的纤维二糖-2-差向异构酶(CE酶)基因作亲本,在其上游融合P43启动子构建成P43-TsCE,将P43-TsCE构建至质粒pUB110中得pUB-P43-TsCE,将质粒pUB-P43-TsCE上的抗生素抗性基因卡那霉素和博来霉素用(<i>dal</i>)替代,构建成pUB-P43-TsCE-dal;将pUB-P43-TsCE-dal转化进宿主1A751(<i>dal</i><i><sup>-</sup></i>)中,得一株表达纤维二糖-2-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌,其保藏编号CCTCC NO:M 2015582。发酵液总酶活达7U/mL,具有重要的工业应用价值。 |
申请公布号 |
CN105368767A |
申请公布日期 |
2016.03.02 |
申请号 |
CN201510779911.3 |
申请日期 |
2015.11.16 |
申请人 |
江南大学 |
发明人 |
沐万孟;江波;陈秋铭;张涛 |
分类号 |
C12N1/21(2006.01)I;C12N15/75(2006.01)I;C12P19/24(2006.01)I;C12R1/125(2006.01)N |
主分类号 |
C12N1/21(2006.01)I |
代理机构 |
无锡市大为专利商标事务所(普通合伙) 32104 |
代理人 |
时旭丹;张仕婷 |
主权项 |
一株基于D‑丙氨酸缺陷型筛选标记的表达纤维二糖‑2‑差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌,其分类命名为枯草芽孢杆菌SK40.001(<i>Bacillus subtilis</i>) SK40.001,已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M 2015582。 |
地址 |
214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号食品科学与技术国家重点实验室 |